《O-GlcNAc糖基化修飾的細胞成像及螢光檢測新方法研究》是依託西北大學，由張英擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：O-GlcNAc糖基化修飾的細胞成像及螢光檢測新方法研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：張英
- 依託單位：西北大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
O-GlcNAc糖基化修飾是一種常見的蛋白質翻譯後修飾方式，其在細胞內的異常表達與多種疾病的發生髮展密切相關。因此對O-GlcNAc糖基化修飾水平進行動態檢測，可作為研究疾病發生髮展及診斷治療的參考依據。由於細胞內O-GlcNAc糖基化修飾蛋白的定位及種類有多樣性、表達豐度低，高靈敏度和特異性的檢測手段相對缺乏。現有的螢光檢測方法存在檢測用底物尚未商品化及不易合成、螢光檢測操作複雜等缺點，阻礙了O-GlcNAc糖基化修飾深入研究。本項目將利用本實驗室建立的FTSC螢光成像技術及改進的底物合成方法，發展一套操作簡單、高效可靠的檢測方法，套用於O-GlcNAc糖基化修飾的活細胞螢光成像；同時建立基於蛋白晶片技術，體外大規模篩查蛋白O-GlcNAc糖基化修飾的螢光檢測新方法。本研究將改進和完善O-GlcNAc糖基化修飾螢光檢測方法，對進一步推動O-GlcNAc糖基化修飾蛋白質組學研究有重要意義。
結題摘要
蛋白質O-GlcNAc糖基化是細胞內一種常見翻譯後修飾，參與調控細胞的生長、分化、凋亡、壓力應激等眾多生理生化和信號轉導活動，而其異常表達則與多種疾病如癌症、老年痴呆症、糖尿病等的發生髮展密切相關。由於O-GlcNAc糖基化修飾具有重要的生物學功能和指示意義，對細胞內部進行該種糖基化修飾的動態監測對研究其功能意義重大。而現有的檢測方法存在代謝用底物尚未商品化和合成步驟複雜；同時後續的螢光檢測需催化劑催化、操作複雜、耗時等缺陷，因而有關O-GlcNAc糖基化修飾的功能機制研究等受到很大限制。通過本研究的開展，建立了生理條件下，螢光試劑與非還原性醛糖、酮糖進行標記的方法，為後續細胞水平O-GlcNAc糖基化修飾的螢光標記和成像研究提供了方法參考；通過建立的化學法合成糖代謝底物類似物，基於寡糖代謝的將帶有酮基的底物類似物轉移至O-GlcNAc糖鏈中，建立了O-GlcNAc糖基化修飾的細胞內螢光原位成像的可視化檢測方法；為了對其結構進行解析，同時建立了一斧法O-糖鏈解離同時螢光標記的技術，在此基礎上建立了基於穩定同位素O-糖鏈質譜相對定量分析方法，為研究O-GlcNAc糖基化修飾的結構包括糖基化位點，以及其在疾病發生髮展中相關性機制研究提供了有力方法；建立了微量生物糖鏈的質譜前處理富集純化方法，為系統性研究生物樣品中低豐度表達的糖蛋白的O-GlcNAc糖基化修飾提供了有效方法；初步建立了基於蛋白晶片和化學酶法技術鑑定和篩選O-GlcNAc糖基化修飾的螢光檢測方法。在項目的支持下,發表SCI論文5篇;第一作者SCI論文2篇,通訊作者SCI論文1篇;多次參加國內外相關領域專業學術會議,與同行專家進行交流和學習,提交會議論文8篇;培養已畢業研究生5人，在研博士研究生1人，在研碩士研究生4人；項目負責人2014年獲評陝西省優秀博士論文獎，2015年以第四參與者獲“張樹政糖科學優秀青年獎”。
