《高特異高通量糖蛋白質類腫瘤標誌物檢測與識別新方法》是依託復旦大學，由陸豪傑擔任項目負責人的重點項目。
基本介紹
- 中文名：高特異高通量糖蛋白質類腫瘤標誌物檢測與識別新方法
- 依託單位：復旦大學
- 項目類別：重點項目
- 項目負責人：陸豪傑
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
蛋白質糖基化是最為普遍和最為重要的翻譯後修飾種類之一，糖基化修飾在疾病中，特別是腫瘤的發生、發展和轉移過程中具有極其重要的意義，蛋白質糖基化程度及糖鏈結構的異常變化常常是癌症及其他疾病發生的標誌，從蛋白質糖基化入手尋找生物標誌物將更加特意和更加靈敏。然而，糖基化這樣一個重要的翻譯後修飾蛋白質組之所以尚未被廣泛開展並不是因為意義不夠重大，而是因為缺乏有效的大規模研究方法以及高靈敏的目標糖蛋白質檢測方法。本項目針對糖蛋白質組研究中的幾大關鍵技術問題發展相應的分析新方法，包括1、新型複合功能納米材料高選擇性分離富集糖蛋白質,2、微納固定酶反應器高效糖蛋白質酶解和去糖鏈,3、化學衍生提高糖肽和糖鏈的離子化效率,4、同位素標記糖蛋白質的相對定量技術和MRM絕對定量技術，和5、分子弛豫技術高靈敏、快速檢測目標糖蛋白質，為挖掘重大疾病如大腸癌等的糖蛋白質生物標誌物提供有效的技術方法和翔實的數據。
結題摘要
蛋白質糖基化是最為重要的翻譯後修飾之一，在疾病發生、發展和轉移中具有極其重要意義。蛋白質糖基化程度及糖鏈結構的異常通常是腫瘤發生的標誌，因此從蛋白質糖基化入手尋找腫瘤標誌物將更特異和更靈敏。然而，目前尚缺乏高特異的大規模研究方法及高靈敏的目標糖蛋白質檢測方法。為了突破該技術瓶頸，本項目發展了系列糖蛋白質組高特異質譜分析新方法和目標糖蛋白質高靈敏甄別方法，主要包括：1、建立了多種糖蛋白質富集新方法，包括新型濾膜輔助肼化學法、非還原胺化法、肟點擊化學法、協同富集，使糖蛋白質的富集時間縮短近6倍，選擇性耐受兩個數量級非糖肽干擾，質譜分析靈敏度達fmol水平，回收率高於90%；2、發展了含氟試劑等多種糖鏈衍生試劑、新基質和固相富集方法，大大簡化了糖鏈質譜分析步驟，可實現10倍肽段干擾時糖鏈的直接質譜分析，糖鏈檢測限降低至amol水平，並有助於解析糖鏈同分異構體；3、發展了多種糖鏈質譜定量新方法，包括同位素胺基酸、同位素含氟試劑、稀土金屬、糖鏈雙端標記策略，實現了酸性糖鏈與中性糖鏈同時高可靠（R2＞0.99）、高重現（CV＜25%）、多通道（4標）的精準定量；4、發展了多重新型核酸等溫擴增LAMP方法（Bst全長DNA聚合酶，金納米顆粒），實現了核酸等溫擴增介導的高靈敏的糖蛋白質檢測。結合ELISA-PLA平台，實現了AKT、c-Fos、CREB和STAT3的O-GlcNAc的糖基化修飾水平的定量檢測；5、發展了多種新型基於納米功能材料的分子探針用於糖蛋白質的檢測，開發了攜帶型生物發光檢測儀，使得目標糖蛋白甲胎蛋白AFP的檢測限達到0.016 ng/ml；6、發展了基於糖蛋白特異性作用的腫瘤細胞和外泌體的高靈敏檢測方法。基於糖蛋白遷移抑制因子（MIF）的SERS免疫法可以區分胰腺癌患者與健康人和腫瘤轉移程度。上述發展的方法已成功套用於腸癌，胰腺癌等臨床樣品的研究，應邀在Chem. Soc. Rev.等期刊撰寫糖蛋白質研究綜述多篇。基於LAMP法開發的多通道分子診斷儀器已經商業化生產， 可用於包括糖蛋白質等生物分子的高靈敏度快速的檢測和甄別。
