《OGT亞型底物蛋白組學方法建立及在乳腺癌研究中的套用》是依託南開大學，由張連文擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：OGT亞型底物蛋白組學方法建立及在乳腺癌研究中的套用
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：張連文
- 依託單位：南開大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
蛋白乙醯葡萄糖胺修飾(O-GlcNAc修飾)參與多種細胞生理過程，與腫瘤、糖尿病等多種疾病密切相關。該修飾主要由N-乙醯葡萄糖胺轉移酶（OGT）、糖苷酶（OGA）協同調節完成。人類細胞中有三種不同OGT亞型，其中sOGT與ncOGT存在於細胞質、細胞核中，mOGT定位於線粒體內。我們發現某些細胞中sOGT與ncOGT底物蛋白顯著不同，而且它們能利用不同糖供體。本課題擬通過糖供體篩選開發兩種糖探針，製備其抗體，建立OGT亞型底物蛋白研究方法；套用該方法研究乳腺癌細胞中不同OGT亞型底物蛋白，並研究特定蛋白糖基化與腫瘤生長、轉移之間的關係。該方法建立有助於從組學水平高通量分析細胞中不同OGT亞型底物蛋白；其在乳腺癌研究中的套用有助於深入了解乳腺癌細胞中蛋白O-GlcNAc修飾途徑，了解特定蛋白糖基化對乳腺癌生長、轉移的影響，為乳腺癌病理研究及相關治療提供理論依據
結題摘要
研究背景：蛋白O-GlcNAc修飾參與多種細胞生理過程，與腫瘤、糖尿病等多種疾病密切相關。細胞內蛋白O-GlcNAc修飾由OGT、OGA協同調節完成。人類細胞中有三種不同OGT亞型，其中sOGT與ncOGT存在於細胞質、細胞核中，mOGT定位於線粒體內。我們發現某些細胞中sOGT與ncOGT底物蛋白顯著不同，而且它們能利用不同糖供體。為此，本項目提出以不同糖供體作為糖探針，研究細胞內不同OGT亞型底物蛋白差異的構想。 研究內容與結果：通過項目研究確定了一種針對sOGT的代謝標記探針GlcNPh（尚未發表）；通過OGT結構改造提高了通用探針GlcNAz的代謝標記效率；發展了一套基於OGA突變體的O-GlcNAc修飾蛋白富集方法（尚未發表）；通過蛋白組學方法發現sOGT與ncOGT底物蛋白差異顯著（＞200種），相對於sOGT ，ncOGT表達能明顯促進HEK293T細胞增殖（尚未發表）；發現導管乳腺癌腋窩淋巴結轉移相關差異O-GlcNAc修飾蛋白，其中部分蛋白參與腫瘤生長和轉移過程；發現OGT可通過caspase-3途徑降解泛素化E3連線酶NEDD4-1; 發現了HNF1A介導的OGT轉錄調控負反饋模式（尚未發表）及OGT自身糖基化（T12A/S56A）對其底物識別和細胞內功能的影響（尚未發表）；建立了細胞內O-GlcNAc修飾雙螢光報告系統，方便實時檢測細胞內糖基化變化（尚未發表）。通過本項目研究，已發表論文6篇(含接受１篇)，待發表論文＞３篇。 科學意義：項目研究所建立的雙螢光報告系統、代謝標記方法和蛋白富集方法將有助於了解細胞內O-GlcNAc修飾動態變化及後續蛋白質組學研究，了解該修飾在生理、病理情況下的作用機制。另外，轉錄和翻譯後翻譯修飾水平研究結果揭示了OGT調控機制，提高了我們對O-GlcNAc修飾相關調節機制的認識水平。
