《Notch信號通路在紅系祖細胞增殖和成熟分化中的調控作用》是依託中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院，由習佳飛擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：Notch信號通路在紅系祖細胞增殖和成熟分化中的調控作用
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：習佳飛
- 依託單位：中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
Notch信號通路參與調控造血幹細胞的命運，但是notch信號通路在紅系增殖和成熟分化中的作用仍不清楚。我們希望利用前期建立的造血幹細胞向紅系祖細胞分化及共培養誘導脫核的體系，在體外對於notch信號通路調控紅系祖細胞體外增殖及成熟分化的作用進行研究，並對其作用機制進行初步的探討。我們將研究體外不同的培養密度條件下Notch信號通路對於紅系祖細胞增殖的影響，通過觀察紅系祖細胞表面標誌的表達，分析其凋亡信號通路及增殖曲線等指標對其增殖進行分析，同時利用我們建立的共培養脫核體系分析Notch信號通路對成熟分化的影響。利用轉基因的方法對紅系祖細胞自身和基質細胞進行基因改造，通過這些方法確認Notch信號通路對紅系祖細胞的分化中的作用。總之本研究將進一步明確Notch信號通路在紅系祖細胞增殖和成熟分化中的作用，研究結果將加深我們對於紅系發育分化機制的理解。
結題摘要
Notch 信號通路參與調控造血幹細胞分化的命運，但是notch 信號通路在紅系細胞增殖和成熟分化中的作用仍不清楚。我們希望利用前期建立的造血幹細胞向紅系祖細胞分化及共培養誘導脫核的體系，在體外對notch 信號通路調控紅系祖細胞體外增殖及成熟分化的作用進行研究，並對其作用機制進行初步的探討。我們將研究體外不同的培養密度條件下Notch信號通路對於紅系祖細胞增殖的影響，通過觀察紅系祖細胞表面標誌的表達，分析其凋亡信號通路及增殖曲線等指標對其增殖進行分析，同時利用我們建立的共培養脫核體系分析Notch 信號通路對成熟分化的影響，通過這些方法確認Notch 信號通路對紅系祖細胞的分化中的作用。我們建立了無血清體系下誘導臍帶血造血幹細胞分化為紅系祖細胞的技術方法，在此基礎上為了進一步深入研究Notch新號通路對於紅系細胞增殖和分化的影響，我們分析了臍帶血單個核細胞定向誘導分化為紅系祖細胞的動力學變化情況，初步獲得了紅系祖細胞分化的動力學數據。按細胞表面標誌表達的不同可將誘導的細胞分為4群，分別對應紅系祖細胞的不同階段；隨著誘導天數的增加，各時間點細胞對應的早期紅系祖細胞群（P2、P3）比例逐漸下降，中晚期紅系祖細胞群（P4、P5）的比例逐漸上升。我們利用深度測序技術對流式分選所獲得的不同發育階段紅系祖細胞進行基因表達分析，獲得了不同階段紅系祖細胞mRNA，miRNA和lncRNA的表達變化數據。根據深度測序的結果我們初步分析了Notch信號通路在不同階段紅系細胞分化中的作用，對Notch信號通路相關基因的表達變化情況進行了初步分析，結果顯示JAG2，NOTCH1，NOTCH3和DTX1四個基因在造血幹細胞向P2階段細胞分化中變化最明顯，四個基因的表達被顯著抑制，另有其他7個Notch信號通路相關基因同樣存在不同程度的抑制，這些結果提示隨著紅系祖細胞的成熟分化，NOTCH信號通路基因表達持續被抑制。我們的研究結果表明抑制Notch信號能夠明顯促進高密度條件下紅系祖細胞的增殖，提高體外培養紅系祖細胞的克隆形成能力，並同時抑制紅系祖細胞的終末成熟分化。本研究進一步明確了Notch 信號通路在紅系祖細胞增殖和成熟分化中的作用，研究結果進一步加深了對於紅系發育分化機制的理解，並對未來利用幹細胞製備均一的紅系祖細胞套用於臨床治療有一定的指導作用。
