Notch1信號系統對子宮內膜異位症幹細胞增殖與分化的調控

《Notch1信號系統對子宮內膜異位症幹細胞增殖與分化的調控》是依託華中科技大學，由李天擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：Notch1信號系統對子宮內膜異位症幹細胞增殖與分化的調控
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：李天
• 依託單位：華中科技大學

中文摘要

子宮內膜異位症是育齡婦女的多發病、常見病，其發病機制尚不明了，臨床診治效果亦不理想。近年來多項研究證實了子宮內膜幹細胞的存在，內異市戰症異位內膜細胞的單克隆性及其表達幹細胞標誌物等現象，為幹細胞異常分化這一新病因學說的提出奠定了理論基礎。幹細胞所處犁籃禁的微環境，即幹細胞壁龕可通過與幹細胞發生直接或間接的作用而調控幹細胞命運，這是個體罹患內異症的根源所在。研究顯示，Notch信號系統可通過鄰近細胞間相互作用精確調控多種幹細胞及原始細胞的發育、增殖及分化而決定細胞命運。本項目以Notch1為切入點，通過基因修飾激活或抑制其表達，探明其在內異症幹細胞增殖分化中的作用及其對幹細胞壁龕的調節，並建立內異症小鼠體內模型，從整體水平探討Notch1信號通路對內異症病灶形態及機能的影響，試圖為揭示內異症幹細胞調控網路尋找突破口，同時為從源頭阻止內異症的發生髮展提供新靶點。

結題摘要

子宮內膜異甩洪蘭汽位症的發病機制至今不明。幹細胞是所有正常及病變細胞的根源，子宮內膜異位症病灶細胞的單克隆性及其表達幹細胞標記物的現象充分提示子宮內膜幹細胞分化理論在內異症中的存在及地位。目前國內外關於Notch1信號轉導通路調控幹細胞命運的報導主要限於造血幹細胞和神經幹細胞研究，而其對子宮內膜幹細胞分化的調控機制及其在內異症病因、治療中的作用尚無人涉及。本課題體外分離、培養子宮內膜幹細胞，深入研究Notch1信號對子宮內膜幹細胞分化的調控機制，試圖從幹細胞異位分化的角度揭示內異症的發病機制，並探討以Notch1信號通路為靶點治療內異症的可能性。首先，運用平板克隆形成法分離純化子宮內膜間質幹細胞和腺上皮幹細胞，並通過幹細胞標誌物的表達來鑑定幹細胞。其次，構建Notch1慢病毒表達載體（Notch1-shRNA），並提取病毒上清，體外研究Notch1-shRNA干預子宮內膜間質幹細胞和腺上皮幹細胞後，兩種子宮內膜煮享鴉想幹細胞的幹細胞活性和分化標誌物的變化及其遷移和侵襲能力的變化，最後利用子宮內膜幹細胞建立內異症小鼠模型進行體內實驗，探討抑制Notch後內異症病灶的變化。結果顯示，從在位子宮內膜中分離純化出的子宮內膜幹細胞的上皮幹細胞表面標誌物EMA、CK、CD49f及間質幹細胞標誌射寒驗物THY-1、collagen type I、5B5、vimentin在子宮內膜幹細胞中表達明顯高於非子宮內膜幹細胞，且所鑑定蛋白的表達與mRNA表達的結果一致。說明人子宮中存在內膜幹細胞，並且與內異症的發病相關。成功構建的攜帶Notch1基因特異性shRNA的重組慢病毒載體，慢病毒重組質粒及包裝質粒共轉染293T細胞，成功地包裝和生產了高滴度的重組慢病毒。LV-Notch1-shRNA在體外可高效地感染子宮內膜幹細胞，其可在轉錄及翻譯兩個水平上高效、特異、穩定地抑制子宮內膜幹細胞中Notch1基因的表達，明顯抑制內膜細胞的克隆形成能力，明顯抑制內膜幹細胞的遷移和侵襲能力，並隨著時間延長其抑制效應呈增強趨勢，而空載照旋旬慢病毒本身對細胞生長無明顯影響。用人內異症子宮內膜幹細胞構建內異症小鼠模型並用Notch1-shRNA進行干預，發現干預後的內異症病灶體積較對照組顯著縮小。本課題證實了Notch1在內異症幹細胞發病機制中的作用，為以其為靶點的內異症基因治療提供了理論依格束臭據。