《MicroRNA-488靶向調控IL-1β表達在痛風性關節炎的作用及機制研究》是依託廈門大學，由周衛東擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：MicroRNA-488靶向調控IL-1β表達在痛風性關節炎的作用及機制研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：周衛東
- 依託單位：廈門大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
痛風性關節炎（GA）是導致男性殘疾和勞動能力喪失的主要原因之一，但發病機制尚未闡明。文獻報導IL-1β是GA發病中最主要的促炎調控因子，提示其可能作為一種潛在的治療靶標。申請人前期聯合生物信息學預測和miRNA表達譜晶片發現有5個在GA患者外周血白細胞中表達下調的miRNA可靶向IL-1β mRNA的3’非翻譯區（3’UTR）。體外實驗確定其中的miR-488可抑制人單核細胞IL-1β的蛋白表達，提示miR-488可能通過靶向調控IL-1β的表達參與GA的發病過程。本項目擬選取miR-488作進一步研究，首先確定miR-488在GA中的表達情況及臨床意義；利用基因轉染、RNAi及報告基因等技術從細胞和分子水平上明確miR-488靶向IL-1β的分子機理；藉助GA動物模型從整體水平上闡明miR-488調控GA發病的確切機制，為確立miR-488作為痛風治療的新靶點提供科學依據。
結題摘要
痛風性關節炎（GA）是導致男性殘疾和勞動能力喪失的主要原因之一，但發病機制尚未闡明。現有研究表明，IL-1β是GA發病中最主要的促炎調控因子，提示其可能作為一種潛在的治療靶標。微小RNAs（miRNAs）是一類內源性非編碼小RNA，可在轉錄後水平上對基因表達進行調控，廣泛參與一系列的細胞生命進程。本項目從臨床、細胞、分子和體內等水平研究了相關miRNAs在GA中的表達情況及其通過靶向IL-1β影響GA的作用及機制。 本項目首先通過miRNA表達譜晶片並聯合生物信息學方法篩選出靶向IL-1β的miRNAs，然後通過螢光定量PCR檢測並確定miR-488和miR-920在GA患者外周血白細胞中表達顯著下調。在體外細胞實驗中，採用單鈉尿酸鹽結晶（MSU）刺激THP-1單核細胞，結果發現MSU可以顯著抑制miR-488和miR-920的表達水平。另外，本課題研究發現，miR-488和miR-920過表達後對MSU誘導的THP-1細胞IL-1β的mRNA表達水平沒有顯著影響，但是均可顯著抑制THP-1細胞IL-1β的蛋白表達，提示miR-488可通過轉錄後水平調控IL-1β的表達。本研究還構建了IL1B 3’UTR野生型和突變型的螢光素酶報告基因質粒載體，然後通過螢光素酶報告基因實驗確定miR-488和miR-920可直接與IL1B 3’UTR結合。為了探索所選miRNA是否參與調控NF-κB信號通路，本實驗通過western blot檢測THP-1細胞過表達miR-488和miR-920後，NF-κB p50、NF-κp65和IκBα的表達情況。結果顯示，MSU可以誘導THP-1細胞NF-κB p50和p65的表達，同時抑制IκBα的表達；miR-488和miR-920表達上調後可抑制MSU誘導的THP-1細胞NF-κB p50和p65的表達，而IκBα的表達則明顯增加，提示這兩個miRNA可通過靶向IL-1β參與NF-κB信號通路的調控。最後，本研究還通過在急性GA大鼠模型中檢測驗證miR-488和miR-920對IL-1β表達的影響，結果顯示miR-488和miR-920表達上調後GA大鼠血清中IL-1β的蛋白水平顯著下降。綜上研究結果，本項目闡明了miR-488和miR-920在GA發病機制中的作用及分子機理，為確立miRNA作為痛風治療的新靶點提供充分的科學依據.
