《miR-135a調控TRPC1在糖尿病腎病發病中的作用及機制研究》是依託中山大學，由黃鋒先擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：miR-135a調控TRPC1在糖尿病腎病發病中的作用及機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：黃鋒先
- 依託單位：中山大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
糖尿病腎病的具體發病機制尚未完全闡明。已知microRNAs(miRNAs)與疾病的發生和發展密切相關，但其在糖尿病腎病中的作用及調節機制尚不明確。我們在前期研究中，套用miRNAs 晶片技術檢測糖尿病腎病患者血清中特異表達的miRNAs，發現miR-135a在糖尿病腎病患者血清中呈明顯上調錶達，經生物信息學技術預測，與糖尿病腎病發病相關的蛋白-瞬時受體電位通道蛋白1（TRPC1）可能受miR-135a調控。本項目擬在前期研究基礎上，從動物、細胞和分子水平明確miR-135a對TRPC1的靶向調節作用，並觀察下調miR-135a水平對糖尿病腎病進程的影響。通過上述研究，為闡明miR-135a調控TRPC1參與糖尿病腎病發病的分子機制提供實驗依據，為臨床早期診斷和治療糖尿病腎病提供新的思路和方法。
結題摘要
糖尿病腎病（Diabetic nephropathy, DN）是糖尿病常見且難治的微血管併發症。腎小球系膜病變是DN最為突出的早期表現，系膜細胞增殖、細胞外基質（Extracellular matrix, ECM）異常增生及由此導致的腎小球硬化是DN進展的關鍵環節。目前，越來越多證據表明microRNA的異常表達與DN的發生、發展密切相關，然而其參與DN的發生機制尚不明確。 本研究套用microRNA晶片篩選DN患者血清特異表達的microRNAs，並明確其在臨床DN患者腎臟活檢標本中的表達，進一步從動物、細胞和分子水平探討其作用及調控的靶基因，為闡明糖尿病腎病發病的分子機制提供實驗依據。 本研究發現： 1．MicroRNA表達譜晶片篩選出的DN血清中上調錶達的33個microRNAs和下調錶達的18個microRNAs。採用Real-time PCR驗證了miR-135a在DN中表達上調，4個microRNAs：miR-34a，miR-194-1，miR-205，miR-215在DN中表達下調。而且，原位雜交的結果顯示miR-135a在DN腎組織中表達較對照升高，且其表達主要位於腎小球系膜細胞細胞及腎小管上皮細胞的胞漿和胞核中。 2. 成功構建TRPC1 3' UTR螢光素酶報告基因的野生型和突變載體。雙螢光素酶報告基因實驗發現，轉染miR-135a mimics能明顯抑制TRPC1 3' UTR野生型基因的螢光素酶活性。 3. TGF-β1能誘導miR-135a的高表達；miR-135a通過靶向調控TRPC1，抑制系膜細胞的SOCE，進而促進系膜細胞增殖和系膜基質增生；miR-135a通過靶向調控TRPC1，抑制腎小管上皮細胞的SOCE，進而促進腎小管上皮細胞的EMT和膠原沉積。 4. LNA-anti-miR-135a可顯著減少db/db小鼠腎組織miR-135a的水平，並上調TRPC1 mRNA的表達；LNA-anti-miR-135a可明顯降低db/db小鼠的體重、血糖、膽固醇和尿白蛋白的排泄；LNA-anti-miR-135a可明顯抑制db/db小鼠腎小球系膜基質擴張和腎間質膠原的沉積；LNA-anti-miR-135a能上調db/db小鼠腎組織TRPC1蛋白的表達，並下調PCNA、Fibronectin和collagen I的表達。
