《miR-365通過靶向MKP-1調控結核分枝桿菌感染的機制研究》是依託復旦大學，由吳晶擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：miR-365通過靶向MKP-1調控結核分枝桿菌感染的機制研究
- 依託單位：復旦大學
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：吳晶
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
microRNA可通過多種方式參與調節結核分枝桿菌（Mycobacterium tuberculosis，MTB）感染過程。我們前期研究發現miR-365在結核病患者外周血單核細胞中表達特徵性上調，且miR-365過表達能抑制絲裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1（MKP-1）mRNA的表達，進而促進炎症因子TNF-α和IL-1β的表達，提示miR-365可能通過靶向調控MKP-1進而調控MTB感染過程。為此，運用多種分子、細胞生物學方法，本研究將系統研究miR-365調控MKP-1表達的分子機制，並進一步從小鼠感染模型驗證該調控作用對MTB誘導的炎症反應及結核菌感染過程的影響。該項目的實施將明確miR-365在抗MTB感染中的調控機制，有助於更好地認識microRNA在結核感染中的作用，為結核病的干預和治療提供新的理論依據。
結題摘要
本課題基於已有的研究基礎，提出miR-365可能通過調控靶位基因MKP-1，調控結核感染誘導炎症反應的假設，計畫對miR-365調控靶位基因MKP-1的分子機制進行分析和驗證。然而我們在項目實際開展中發現，miR-365對主要的炎症細胞因子TNF-α，IL-1β，IL-8起下調作用，證實了miR-365對於炎症反應的負性調控。但是在不同細胞的mRNA水平和蛋白水平實驗中，都無法證實miR-365對MKP-1的調控作用。我們進一步通過生物信息學的方法，綜合考慮miR-365對炎性因子存在明顯的負性調控作用，大膽假設miR-365的靶位基因之一可能是炎症通路上的重要成員。為了研究miR-365在結核感染中的作用機制，通過仔細地比對和分析，結合實驗進一步排查的雙重手段，我們把目標重新鎖定為MyD88基因。找到miR-365可能調控的新的靶位調控基因後，我們按照研究計畫，通過miR-365過表達和抑制表達的模型，在不同的體外細胞模型中，從mRNA水平和蛋白水平證實了miR-365對MyD88的負性調控。為了進一步確認miR-365對MyD88基因的調控序列，構建了新的螢光素酶報告基因檢測系統，確定了靶位序列在調控中所起的作用。以上這些實驗闡明了miR-365在結核感染中，可以通過靶位調控MyD88基因的表達與功能，負性調控結核誘導的炎症反應。 同時，前期驗證miR-365為結核感染中重要的微小RNA的臨床佇列招募中，我們同時發現結核誘導的細胞因子表達差異可以區分活動性結核患者和潛伏結核感染者；此外我們還評價了結核特異性的抗體反應對活動性結核和潛伏結核的區分能力。
