《MicroRNAlet7b對TLR4介導的血小板貯存損傷的調控機制研究》是依託復旦大學，由夏榮擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：MicroRNAlet7b對TLR4介導的血小板貯存損傷的調控機制研究
- 依託單位：復旦大學
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：夏榮
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
血小板貯存損傷（PSL）主要由血小板活化和凋亡引起，是引起血小板貯存時間短、回輸患者體內活力下降的主要原因，嚴重影響血小板輸注效果甚至造成血小板輸注無效，然而，離體貯存血小板發生活化和凋亡的機制目前未明。前期研究發現microRNALet7b在血小板貯存過程中表達發生明顯改變，並可與血小板活性正相關的TLR43-UTR區結合調控其表達，提示microRNAsLet7b-TLR4通路可能在其中起重要作用。本課題擬進行以下研究：1.從血小板活化和凋亡兩個方面，探討microRNALet7b-TLR4及其下游調控通路引起PSL的分子機制；2.驗證以microRNALet7b為作用靶點降低PSL的可行性；3.小鼠體內試驗證實microRNALet7b-TLR4對貯存血小板活力及輸注效果的影響。預期結果將有助於進一步認識血小板貯存損傷的發生機制，同時也將為研發新型血小板保存液提供實驗基礎和理論依據。
結題摘要
血小板儲存損傷（Platelet Storage Lesion, PSL）嚴重影響血小板保存質量和輸注療效，凋亡是導致PSL的主要誘因。本研究發現血小板儲存期間microRNA let-7b呈差異表達，並可對血小板Bcl-xL進行轉錄後調控。基於高通量測序對血小板轉錄組mRNA和miRNA水平進行深度生物學信息分析，研究儲存血小板RNA表達、降解機制，及mRNA和miRNA互作網路；然後通過蛋白表達、互作關係及miRNA轉錄後調控機制分析儲存血小板Bcl-2蛋白家族調控線粒體介導凋亡的作用機制。通過靶基因預測發現microRNA let-7b可與Bcl-xL mRNA 3ʹ-UTR結合，進一步分析了血小板室溫保存期間Bcl-2蛋白家族和microRNA let-7b的持續表達情況，進而分析microRNA let-7b靶向調控Bcl-2家族基因表達翻譯的作用機制。實時定量PCR結果顯示血小板儲存期間microRNAlet-7b表達上調；Bcl-xL和Bak的互作影響血小板的凋亡；通過靶基因預測，構建Bcl-xL mRNA 3ʹ-UTR，雙螢光素酶檢測驗證了microRNA let-7b調控Bcl-xL mRNA表達的作用；細胞轉染確認let-7b能抑制Bcl-xL而促進Bak的蛋白翻譯，而定量PCR結果顯示mRNA沒有發生明顯變化，說明血小板儲存期間存microRNAlet-7b對Bcl-xL的轉錄後調控作用。血小板室溫保存期間，microRNA let-7b表達增加以抑制Bcl-xL的表達，導致Bak表達增加、促凋亡活性增強，促進血小板的凋亡。此外，我們還人工合成了miRNA let 7b 模擬物（mimic）和抑制物（inhibitor）兩段核苷酸序列，發現let 7b mimic促進血小板的聚集，let 7b inhibitor能抑制血小板的聚集，進一步研究了let 7b inhibitor對血小板鋪展，及血塊回縮功能的抑制；同時let 7b inhibitor對血小板功能的抑制的機制研究進行了初步探討。本項目研究結果有助於進一步認識血小板貯存損傷的發生機制，同時也將為研發新型血小板保存液提供實驗基礎和理論依據。
