《CD4+CD25+調節性T細胞對腫瘤幹細胞的影響及其調控機制研究》是依託天津醫科大學，由李慧擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：CD4+CD25+調節性T細胞對腫瘤幹細胞的影響及其調控機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：李慧
- 依託單位：天津醫科大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
腫瘤微環境對於腫瘤細胞特別是腫瘤幹細胞（CSCs）的調控，在腫瘤的進展、轉移和治療反應中發揮重要作用，因此探討腫瘤微環境對腫瘤幹細胞的調控作用及機制，對於改善腫瘤治療效果具有重要意義。腫瘤微環境中的CD4+CD25+調節性T細胞（Tregs），被認為是腫瘤免疫抑制的主要機制之一，但其對於腫瘤幹細胞的影響目前尚未見報導。本研究主要探討調節性T細胞對於乳腺癌幹細胞數量及功能的影響；在此基礎上驗證TGF-β誘導的上皮間質轉化（EMT）或Smad信號通路，是否為Tregs調控CSCs的主要機制；同時，探討干擾TGF-β的靶向治療與化療聯合套用，是否可以提高腫瘤治療的效果，並成為腫瘤治療的新策略之一。總之，通過本項目驗證腫瘤微環境中的調節性T細胞，在影響腫瘤幹細胞的數量及功能，進而影響腫瘤進展當中的作用，從而為研究Tregs在腫瘤進展中的作用提供新的機制，並在此基礎上為開發新型治療策略提供依據。
結題摘要
腫瘤微環境對於腫瘤細胞特別是腫瘤幹細胞的調控，在腫瘤的進展、轉移和治療中發揮重要作用，因此探討腫瘤微環境對CSCs的調控作用及機制，對於改善腫瘤患者預後具有重要意義。腫瘤微環境中的調節性T細胞，被認為是腫瘤免疫抑制的主要機制之一，但其對CSCs的影響目前尚未見報導。本研究主要探討Tregs對於乳腺癌CSCs數量及功能的影響；在此基礎上驗證TGF-β1誘導的上皮間質轉化是否是Tregs調控CSCs的主要機制。方法：1.收集乳腺癌組織標本104例，套用免疫組化檢測標本中Tregs和ALDH1陽性細胞的數量，分析與臨床病理特徵之間的聯繫以及兩者之間的相關性。2.免疫磁珠法分離乳腺癌患者外周血中CD4+CD25+Tregs，與乳腺癌細胞株MCF-7和BT474共孵育。檢測共孵育前後EMT相關標誌物及轉錄因子表達的變化。細胞劃痕實驗和transwell侵襲實驗評價細胞遷移和侵襲能力的變化。流式細胞術、real-time PCR和western blot分別檢測BT474細胞中CSCs細胞比例以及ALDH1基因和蛋白表達的改變。體外微球培養和微球連續傳代實驗檢測Tregs對BT474細胞中CSCs樣細胞數量和自我更新能力的影響。裸鼠異種移植瘤模型評價Tregs對乳腺癌細胞體內成瘤能力的影響。3.利用TGF-β1受體小分子阻滯劑阻斷TGF-β1通道評價TGF-β1在Tregs調控乳腺癌細胞EMT和乾性特徵中的作用。建立腫瘤細胞與Tregs的隔離培養和共培養體系來探討Tregs發揮作用的方式。結果：1.38.5%的乳腺癌標本可見ALDH1蛋白的表達，在低分化腫瘤、雌激素受體陰性、孕激素受體陰性及三陰性乳腺癌患者中含有較多的ALDH1+細胞。Tregs在分化程度較低和有淋巴結轉移患者中數量較多。且兩者之間存在正相關性。2.與Tregs共孵育後BT474細胞間質性標誌物表達增高；MCF-7細胞上皮性標誌物表達降低，間質性標誌物表達增高。EMT相關轉錄因子Slug的表達以及細胞遷移和侵襲能力在兩組腫瘤細胞中都明顯上調。BT474細胞中CSCs樣細胞比例，體外微球形成、自我更新能力以及小鼠體內致瘤能力增強。3.阻斷TGF-β通路可以阻斷Tregs誘導的乳腺癌細胞EMT和乾性增加。共孵育組上清中TGF-β1濃度稍高於對照組。免疫螢光顯示Tregs表面可見TGF-β1表達。
