蛋白質純化技術及套用

基本信息

蛋白質純化技術及套用

作者：陸健 等編著

出版日期：2005年9月

書號：7-5025-7382-8

開本：16

裝幀：平

版次：1版1次

頁數：352頁

內容簡介

本書介紹了蛋白質純化技術，對基本原理及套用實例作了詳細的闡述。全書共十一章，主要內容包括：蛋白質樣品的預處理，凝膠過濾色譜，離子交換色譜，親和色譜，共價色譜，電泳技術，特殊用途蛋白質的純化，不同來源蛋白質的純化，蛋白質的常用指標分析以及實驗部分。書中不少內容在國內還是首次被系統介紹。

本書適合綜合性大學及農、醫、師範等高校相關專業教師和學生使用，也可供從事生物技術、醫藥工業和食品技術等相關工業領域及研究院所的研發人員參考。

目錄

1緒論1

11蛋白質純化的意義1

12純化蛋白質常用的方法1

13蛋白質純化的設計2

131基本原則2

132過程最佳化3

133經濟性4

14規模化蛋白質純化5

141基本原則5

142主要操作過程6

2蛋白質樣品的預處理11

21蛋白質樣品的提取和分離11

211細胞的破碎12

212蛋白質樣品的分離15

22蛋白質樣品的濃縮17

221吸附法18

222超濾法18

223沉澱法20

224透析法21

225冷凍乾燥法21

226雙水相分離法21

23蛋白質樣品的沉澱22

231鹽析法23

232有機溶劑沉澱法25

233等電點沉澱法26

234聚乙二醇沉澱法26

235選擇性沉澱法27

24蛋白質樣品的透析27

241基本原理27

242套用28

3凝膠過濾色譜29

31概述29

311基本原理29

312凝膠的性質和種類36

313凝膠介質的選擇41

32凝膠柱的操作42

321裝柱42

322樣品和緩衝液的準備46

323色譜條件47

324加樣和洗脫48

325凝膠柱的再生及保存49

33套用49

331脫鹽49

332蛋白質分離50

333測定蛋白質分子量51

334蛋白質復性的研究51

335其他52

4離子交換色譜53

41基本概念54

411蛋白質的電性質55

412離子交換理論60

413離子交換的解析度62

42固定相：離子交換劑66

421基本結構66

422功能基團和酸鹼性質67

423離子交換劑的部分性質68

424離子交換劑的類型74

43流動相：緩衝液和鹽86

431緩衝液的類型87

432緩衝液的pH和濃度88

433離子對色譜行為的影響89

434添加劑90

44實驗方案設計91

441離子交換劑的選擇91

442緩衝液的選擇和色譜條件的確定94

443色譜柱的尺寸98

444分批分離99

45色譜技術100

451離子交換劑的準備100

452樣品的準備102

453加樣103

454洗脫技術105

455樣品的收集和處理113

456離子交換劑的再生、清洗、消毒和儲存114

46套用實例115

461用DEAESepharose色譜分離真菌纖維素酶115

462用Mono S和Mono Q連續色譜法從雞肌肉組織分級分離

糖酵解酶類116

463用Mono Q陰離子交換分離白血病細胞N乙醯βD氨基

葡萄糖苷酶的同工酶117

464用BioRex　70色譜分離眼鏡蛇神經毒素的六種單乙醯基衍

生物118

465用階段洗脫法大規模純化人血清白蛋白和免疫球蛋白G119

5親和色譜120

51親和吸附劑121

511配體和載體的選擇121

512親和吸附劑的製備方法123

513商品化基團特異性吸附劑128

52色譜技術130

521親和色譜操作過程130

522親和色譜的操作注意事項132

523親和色譜的吸附容量與吸附效率132

53親和色譜的特殊類型133

531凝集素親和色譜133

532免疫親和色譜137

533環氧乙烷丙烯醯胺珠親和色譜140

534金屬螯合親和色譜142

535疏水作用色譜144

54套用145

541抗體和抗原的純化145

542酶的純化145

543糖蛋白的純化145

544脂蛋白的純化145

6共價色譜146

61巰基的化學性質147

611離子化、氧化、金屬聯結、烷基化147

612巰基二硫化物互換反應148

613與活性二硫化物的反應149

614巰基與二硫氧化物的反應150

62含巰基的蛋白質151

621生物體中的氧化還原態151

622胞內與胞外的蛋白質151

623蛋白質巰基基團的解蔽151

624蛋白質二硫鍵的還原152

625巰基的引入152
626巰基基團的衍生化作用152
63共價色譜的凝膠152
631原理152
632凝膠的基質153
633凝膠的固定相153
634固定相活性基團的比較153
635凝膠固定相的引入155
636凝膠的取代程度和實際容量157
64色譜技術158
641預備158
642蛋白樣品的結合158
643洗滌159
644還原洗脫159
645巰基蛋白的回收160
646巰基凝膠的再生161
647反向共價色譜162
65套用實例162
651從刀豆中分離脲酶162
652木瓜蛋白酶的純化163
653共價色譜的順序洗脫164
654巰基多肽的純化165
655大腸桿菌β半乳糖苷酶的可逆固定165
656蛋白質亞基的鑑定166
7電泳技術167
71概述167
711原理167
712分類169
713介質170
714電泳儀器172
715染色方法173
72常規聚丙烯醯胺凝膠電泳174
721原理174
722常規PAGE的類型175
723影響分離結果的外在因素175
724蛋白質分子量的測定176
725常規PAGE的實驗方法177
726PAGE的套用範圍181
73SDS聚丙烯醯胺凝膠電泳181
731原理181
732SDSPAGE的類型182
733影響分離結果的外在因素182
734蛋白質分子量的測定183
735SDS聚丙烯醯胺凝膠電泳的實驗方法183
736SDSPAGE的套用範圍184
74等電聚焦184
741原理185
742載體兩性電解質pH梯度的形成186
743載體兩性電解質等電聚焦方法187
744固相pH梯度的介質及其pH梯度的形成189
745固相pH梯度等電聚焦方法192
746等電聚焦的套用範圍194
75雙向電泳194
751原理194
752雙向電泳實驗方法194
753套用196
76免疫電泳197
761原理197
762電泳方法199
763套用200
77蛋白質印跡200
771原理200
772試驗材料的選擇201
773蛋白質印跡試驗方法202
774套用203
78毛細管電泳203
8特殊用途蛋白質的純化204
81測序用蛋白質的純化204
811測序蛋白純化技術205
812多肽的製備和純化207
82用於晶體學研究的蛋白質純化208
821蛋白質結晶方法211
822不均一性對蛋白質結晶的影響214
83融合蛋白的純化218
831融合蛋白的純化過程219

832蛋白質的水解保護225
833常用融合技術227
834融合蛋白純化實例231
84包含體的初步純化233
841影響包含體形成的因素233
842細胞勻漿中包含體的分離233
843包含體的洗滌233
85膜蛋白的純化234
851蛋白質的溶解性235
852膜蛋白的純化237
86治療用蛋白質的純化238
861治療用蛋白純化的關鍵問題239
862工藝確認242
9不同來源蛋白質的純化244
91微生物細胞培養蛋白質的純化244
911色譜純化方法244
912蛋白質離子交換純化245
92哺乳動物細胞培養蛋白質的純化250
921工藝設計251
922細胞分離252
923產品的初步回收和分離252
924主要純化方法252
925樣品純化舉例——單克隆抗體的純化253
926消除污染254
93動物組織蛋白質的純化256
931組織的選擇256
932組織破碎257
933防止蛋白質的有害水解257
934亞細胞分級分離257
935膜蛋白的溶解259
936動物蛋白質純化舉例260
94植物組織蛋白質的純化263
941影響植物組織蛋白質純化的因素263
942材料來源263
943確定植物蛋白種類的直接和間接策略267
944樣品純化舉例268
10蛋白質的常用指標分析271
101蛋白質的含量分析271
1011測定蛋白質濃度的方法271
1012紫外分光光度法271
1013Lowry法274
1014二喹啉甲酸檢測法277
1015考馬斯亮藍染色法278
102蛋白質的分子量測定281
1021SDSPAGE凝膠電泳法測定蛋白質的分子量282
1022凝膠過濾色譜法測定天然蛋白質的分子量286
103蛋白質的等電點測定288
1031蛋白質的等電點288
1032等電聚焦技術289
1033超薄聚丙烯醯胺凝膠等電聚焦法測定蛋白質的等電點289
104蛋白質的純度分析294
1041純度標準294
1042常用的純度檢測方法294
105糖蛋白質中的糖含量分析296
1051糖蛋白的化學分析296
1052SDS凝膠中的糖蛋白染色法297
106蛋白質和肽的N末端胺基酸測定299
1061FDNB法300
1062DNS分析法301
1063Edman降解法304
107蛋白質N末端序列分析306
1071DNSEdman法308
1072DABITC/PITC雙偶合法309
108蛋白質和肽的C末端分析313
1081概述313
1082C末端序列分析的羧肽酶Y法314
11實驗部分317
111用於蛋白質純化的儀器(工作站)317
1111蛋白質純化系統的主要部件317
1112幾種常見的蛋白質色譜系統320
112蛋白質分離純化實例322
1121蔗糖酶的分離純化322
1122轉谷氨醯胺酶的分離純化323
1123純化重組蛋白Pseudomonasaeruginosa外毒素A325
1124Ecoli中RNA聚合酶的提取和純化329
1125從Ecoli中分離製備高純度的去乙醯頭孢菌素C合成酶330