分離純化蛋白質

分離純化蛋白質的方法有透析、超濾法、鹽析，透析是利用透析袋把大分子蛋白質與小分子化合物分開的方法。

基本介紹

• 中文名：分離純化蛋白質
• 方法1：透析
• 方法2：超濾法 
• 方法3：鹽析

分離方法

* 透析(dialysis)利用透析袋把大分子蛋白質與小分子化合物分開的方法。

* 超濾法
套用正壓或離心力使蛋白質溶液透過有一定截留分子量的超濾膜，達到濃縮蛋白質溶液的目的。

*丙酮、乙醇等有機溶劑沉澱法，可破壞蛋白質的水化層，在0～4℃低溫下，使蛋白質沉澱。環境溫度高等不良因素影響下，有機溶劑可促使蛋白質變性。

*鹽析(salt precipitation)是將硫酸銨、硫酸鈉或氯化鈉等加入蛋白質溶液，使蛋白質表面電荷被中和以及水化膜被破壞，導致蛋白質沉澱。

* 免疫沉澱法：利用特異抗體識別相應的抗原蛋白，並形成抗原抗體複合物的性質，可從蛋白質混合溶液中分離獲得抗原蛋白。
* 電泳法：蛋白質在高於或低於其pI的溶液中為帶電的顆粒，在電場中能向正極或負極移動。這種通過蛋白質在電場中泳動而達到分離各種蛋白質的技術, 稱為電泳(elctrophoresis) 。幾種重要的蛋白質電泳：

電泳操作

*SDS-聚丙烯醯胺凝膠電泳，常用於蛋白質分子量的測定。
*等電聚焦電泳，通過蛋白質等電點的差異而分離蛋白質的電泳方法。
*雙向凝膠電泳是蛋白質組學研究的重要技術。

分離純化蛋白質

* 層析(chromatography)或色譜法：待分離蛋白質溶液（流動相）經過一個固態物質（固定相）時，根據待分離蛋白質的顆粒大小、電荷多少及親和力等，使蛋白質組分在兩相中反覆分配，並以不同速度流經固定相而分離蛋白質。凝膠過濾（分子篩，gel filtration；排阻色譜）：利用各蛋白質分子大小不同分離。
離子交換：蛋白質的電荷量及性質不同。
陽離子交換劑：CM-纖維素
陰離子交換劑：DEAE-纖維素
親和層析：抗原-抗體，配體-受體，金屬離子，生物素等
高效液相（HPLC）：反相HPLC，離子HPLC，凝膠過濾HPLC
* 超速離心法(ultracentrifugation)：根據蛋白質的分子量與形狀分離。