蛋白質純化實驗方案與套用

《蛋白質純化實驗方案與套用》是2010年6月1日化學工業出版社出版的圖書，作者是呂憲禹。

基本介紹

• 書名：蛋白質純化實驗方案與套用
• 作者：呂憲禹
• ISBN：9787122080066
• 頁數：211
• 定價：58.00
• 出版社：化學工業出版社
• 出版時間：2010年6月1日 
• 裝幀：平裝
• 開本：16開
• 字數：263000

內容簡介

本書詳細介紹了各類蛋白質純化實驗技術，包括材料的預處理、蛋白質的粗提、經典色譜方法、高效液相色譜、質譜、電色譜、分子印跡、電泳以及蛋白質檢測的實驗方案及套用實例。

強調可操作性，對每一項實驗技術，都系統介紹其原理方法和實驗過程，特別注重講解問題分析及解決方案，讓讀者了解到每一點成就都是建立在大量方案設計、具體步驟以及實驗結果的正確處理的基礎之上。

不僅含有經典的實驗技術，還特別突出了當前實驗的新理論、新技術與新發展，給予蛋白質純化專業人員以借鑑和引導作用。

本書對於遺傳學、細胞生物學、分子生物學，以及醫學和生物工程領域研究人員開展蛋白質相關研究，具有很強的參考價值。

目錄

第1章 緒論

1.1 蛋白質的研究歷史

1.2 蛋白質的理化性質和生物學特性

1.3 蛋白質純化手段的歷史回顧

1.4 純化蛋白的套用

參考文獻

第1部分 材料的預處理和蛋白質的粗提

第2章 不同來源材料的預處理

2.1 不同材料的預處理

2.1.1 植物材料的預處理

2.1.2 動物材料的預處理

2.1.3 微生物材料的預處理

2.2 細胞的破碎

2.2.1 機械法

2.2.2 非機械法

方案2.1 超音波法提取菸草葉中的3-磷酸甘油脫氫酶

方案2.2 從豬胰臟中提取胰凝乳蛋白酶

方案2.3 從大腸桿菌中提取誘導表達的（His）6-X

參考文獻

第3章 蛋白質的沉澱

3.1 鹽析法

3.2 有機溶劑沉澱法

3.3 等電點沉澱法

3.4 非離子多聚物沉澱法

3.5 選擇性沉澱法

方案3.1 用鹽析法選擇性沉澱蛋白質

方案3.2 用有機溶劑沉澱蛋白質

方案3.3 使用蛋白質排阻和擁擠劑選擇性沉澱蛋白質

參考文獻

第4章 蛋白質的濃縮

4.1 吸附法

4.2 超濾法

4.3 沉澱法

4.4 透析法

4.5 冷凍乾燥法

4.6 雙水相分離法

方案4.1用透析袋進行脫鹽、濃縮和更換緩衝液

方案4.2用不對稱圓盤膜超濾進行濃縮或透析

參考文獻

第2部分 色譜法分離純化蛋白質

參考文獻

第5章 凝膠過濾色譜

5.1 基本原理

5.2 實驗方案設計

5.2.1 凝膠介質的選擇

5.2.2 凝膠介質的預處理

5.2.3 色譜柱的選擇

5.2.4 凝膠柱的裝填

5.2.5 樣品處理和上樣

5.2.6 洗脫和收集

5.2.7 色譜柱的清洗、再生與保存

方案5.1 用凝膠過濾色譜更換緩衝液

方案5.2 凝膠過濾色譜分離三種分子量不同的蛋白質

參考文獻

第6章 離子交換色譜

6.1 基本原理

6.2 實驗方案設計

6.2.1 離子交換介質的選擇

6.2.2 流動相的選擇

6.2.3 色譜柱的選擇

6.2.4 離子交換劑預處理和裝柱

6.2.5 加樣

6.2.6 洗脫

6.2.7 洗脫組分的收集和分析

6.2.8 離子交換劑的再生、清洗與儲存

方案6.1 弱陰離子交換色譜和強陽離子交換色譜在分離純化單克隆抗體中的套用

參考文獻

第7章親和色譜54

71基本原理54

72親和色譜的幾種類型55

721金屬螯合親和色譜55

722免疫親和色譜56

723凝集素親和色譜56

73實驗方案設計56

731親和吸附劑的選擇56

732裝柱56

733上樣57

734吸附57

735流速和清洗57

736洗脫57

737再生和保存58

方案71親和色譜純化抗體融合蛋白58

方案72金屬螯合親和色譜分離大腸桿菌重組表達的蛋白61

方案73從大腸桿菌中提取誘導表達的GST標籤融合蛋白63

參考文獻65

第8章疏水色譜66

81基本原理66

82實驗方案設計67

821疏水配基的選擇67

822離子強度及種類67

823破壞水化作用的物質68

824溫度68

825洗脫方式68

826表面活性劑68

827色譜柱使用後的處理69

方案81用疏水色譜去除抗體融合蛋白樣品中的多聚體69

參考文獻72

第9章分子印跡技術73

91分子印跡主要術語74

911功能單體74

912交聯劑74

913溶劑和致孔劑75

914引發劑75

915適用的印跡分子76

92分子印跡的分類76

921共價型76

922非共價型77

93印跡效率的評價77

931保留因子77

932分離因子77

933分離度77

934等溫吸附方程78

935經典孔徑分布曲線78

936吸附曲線78

937其他手段78

94分子印跡技術在蛋白質分離中的展望78

方案91溶菌酶分子印跡的製備和套用80

方案92血紅蛋白分子印跡的製備和套用83

參考文獻86

第10章高效液相色譜法分離純化蛋白質88

101高效液相色譜的基本原理和分類88

1011與經典液相(柱)色譜法比較88

1012高效液相色譜法的特點88

1013高效液相色譜儀89

1014高效液相色譜常用參數90

1015高效液相色譜儀標準操作規程92

102常用流動相的極性和選擇94

1021何謂流動相94

1022流動相的性質要求 94

1023流動相的選擇95

1024準備流動相的一般過程95

1025鹵代有機溶劑應特別注意的問題 97

1026HPLC用水97

1027常用流動相組分的物理特性97

103常用檢測器97

1031概述97

1032檢測器的性能指標98

1033各類檢測器99

104特異性蛋白專用柱特點和操作106

1041固定相106

1042色譜類型106

1043常用鍵合相的表面化學結構107

1044色譜柱 107

105常見故障排除109

1051與色譜柱相關的問題109

1052造成色譜峰(不對稱)拖尾的原因110

1053如何解決峰形拖尾的問題110

1054如何貯存色譜柱111

1055譜圖問題111

1056常見故障111

106高效液相色譜在蛋白質分離純化中的套用實例115

1061反相色譜分離蛋白質115

方案101肽類酶解混合物色譜過程117

方案102蛋白質樣品純化色譜過程118

方案103白細胞介素2反相高效液相色譜純化119

方案104水蛭素12肽的反相高效液相色譜純化120

1062疏水作用色譜121

方案105高效疏水作用色譜分離純化四種蛋白質純品125

方案106人唾液蛋白的高效疏水色譜分離純化126

方案107疏水作用色譜法同時純化及復性基因重組人干擾素127

1063高效離子交換液相色譜法純化蛋白質分子128

方案108高效陰離子交換液相色譜法129

方案109高效陽離子交換液相色譜法130

方案1010高效離子交換色譜法分離皖南尖吻蝮蛇毒活性組分131

方案1011高效離子交換色譜(HPIEC)分離經HPHIC 分離後的微粒體P450132

1064高效排阻液相色譜法純化蛋白質分子133

方案1012高效體積排阻液相色譜基本操作程式135

方案1013重組人粒細胞集落刺激因子分子量測定136

參考文獻137

第11章毛細管電色譜及其在蛋白質分離純化中的套用138

111毛細管電色譜138

112毛細管電色譜技術歷史回顧138

113毛細管電色譜基本分離模式139

1131開管柱電色譜139

1132填充柱電色譜140

1133整體柱電色譜140

1134CEC分離模式的選擇141

1135CEC、CE和HPLC的對照分析141

114毛細管電色譜在蛋白分離分析中的新技術142

1141線上樣品預濃集毛細管電色譜聯用技術142

1142毛細管電色譜質譜聯用技術在蛋白分離分析中的套用143

115毛細管電色譜基本術語和原理143

1151電遷移和電滲、電滲流、電動現象、焦耳熱效應143

1152保留機制和分離機理143

116毛細管電色譜儀器144

1161毛細管電色譜儀器的基本要求144

1162基本裝置145

1163檢測系統145

方案111離子交換電色譜純化蛋白質的研究146

方案112微流控晶片多維毛細管電色譜分離牛血清白蛋白酶消解產物150

方案113毛細管電色譜耦合飛行時間質譜分離鑑定卵清蛋白的酶解

產物153

參考文獻154

第12章其他色譜分析方法簡介156

121超臨界流體色譜156

1211超臨界流體簡介156

1212超臨界流體色譜簡介156

1213SFC的流動相156

1214SFC的固定相157

1215SFC的檢測系統157

1216在線上分析與定性158

122逆流色譜158

1221簡介158

1222逆流色譜的特點159

1223溶劑體系的選擇和製備159

1224CPC的檢測儀器160

123親水色譜160

1231簡介160

1232HILIC的特點160

1233HILIC固定相161

1234展望162

124快速色譜162

1241簡介162

1242快速色譜原理與系統組成162

1243與製備HPLC的關係163

參考文獻163

第3部分電泳法分離純化蛋白質

第13章聚丙烯醯胺凝膠電泳166

131聚丙烯醯胺凝膠電泳常用溶液及配製166

132不連續聚丙烯醯胺凝膠電泳167

133變性聚丙烯醯胺凝膠電泳167

134聚丙烯醯胺梯度凝膠電泳169

135小分子多肽凝膠電泳170

136非變性聚丙烯醯胺凝膠電泳170

137聚丙烯醯胺凝膠中蛋白的回收170

方案131SDS變性電泳分析牛血清白蛋白（BSA）171

方案132BSA變性梯度膠電泳方案173

方案133小分子多肽（抗菌肽）凝膠電泳174

方案134非變性聚丙烯醯胺凝膠電泳175

參考文獻177

第14章聚丙烯醯胺等電聚焦178

141聚丙烯醯胺等電聚焦具有高解析度的特點178

142等電聚焦pH梯度的形成178

143等電聚焦電泳板式179

方案141HeLa細胞裂解液等電聚焦179

參考文獻181

第15章雙向電泳182

151樣品的製備182

152IPG的選擇和上樣183

153第一向電泳：等電聚焦電泳（IEF）183

154IPG膠條平衡184

155採用垂直系統進行第二向電泳：十二烷基硫酸鈉聚丙烯醯胺凝膠

電泳（SDSPAGE）184

方案151HeLa細胞周期依賴性蛋白表達和修飾的分析184

參考文獻186

第4部分蛋白質純化效果的評價和蛋白質分析

第16章蛋白質濃度、純度及活性的分析188

161測定蛋白質濃度的方法簡介188

1611凱氏定氮法188

1612雙縮脲法188

1613Lowry法189

1614紫外分光光度法189

1615考馬斯亮藍染色法190

1616BCA檢測法190

162測定蛋白質純度的方法簡介190

1621電泳法190

1622色譜法190

1623免疫化學法190

163測定蛋白質活性的方法簡介191

方案161雙縮脲法測定未知蛋白的含量191

方案162BCA法測定蛋白質濃度192

方案163豆類中球蛋白的定量分析193

方案164心肌、骨骼肌線粒體內膜ATPase的測定194

方案165螢光分光光度法測定肌肉中乳酸脫氫酶的活性195

參考文獻196

第17章蛋白質的分析及套用197

171質譜技術在蛋白質分析中的套用197

172核磁共振法在蛋白質分析中的套用197

173X射線晶體學相關的蛋白質純化198

方案171白眉蝮蛇蛇毒精氨酸酯酶分離提純及分子量的質譜測定198

方案172腫瘤差異蛋白質的質譜定性198

方案173果蠅蛋白質磷酸化的質譜分析200

方案174核磁共振法研究細胞色素空間結構202

方案175以X射線衍射為目的的SARSCOV Mprc蛋白的分離純化202

參考文獻203