《胰島素通過miR-92a調控雄激素合成的作用及其機制研究》是依託中山大學，由楊冬梓擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：胰島素通過miR-92a調控雄激素合成的作用及其機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：楊冬梓
- 依託單位：中山大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
高胰島素血症與高雄激素血症是PCOS的兩大基本病理特徵。臨床研究顯示高胰島素血症可加重高雄激素血症。本課題組既往研究證實高胰島素狀態下miRNA是調控雄激素合成的關鍵分子，我們篩選和驗證了miR-92a在伴有高胰島素血症PCOS患者的卵巢組織中表達下調最明顯，並證實miR-92a通過調控雄激素合成關鍵酶CYP17促進雄激素的合成，且該作用呈現胰島素時間-劑量依賴性。為深入探討胰島素調控miR-92a的分子機制，本項目擬進一步採用高通量轉錄因子晶片篩選胰島素刺激下調控miR-92a的轉錄因子，並通過EMSA、CHIP、BSP等方法獲得轉錄因子調控miR-92a的直接證據，揭示胰島素在轉錄和表觀遺傳學水平調控miR-92a表達，進而促進雄激素合成的分子機制；為闡明PCOS高胰島素血症調控高雄激素血症內在作用關鍵因子，阻斷其病理進程提供新線索；為臨床治療提供新思路，為發展新型基因治療藥物奠定基礎
結題摘要
多囊卵巢綜合徵是臨床最常見的婦科內分泌疾病之一，臨床上以稀發排卵或無排卵、高雄激素血症、卵巢多囊性改變等為典型表現。然而，PCOS排卵障礙的機制至今尚未明確。本課題組首先通過PCOS卵巢局部的因素，證明了卵巢局部miRNA的差異表達參與了卵泡發育障礙的過程，其次從激素分泌的角度證明了高雄激素通過促進卵巢顆粒細胞分泌AMH從而影響卵泡發育。 本課題在前期PCOS卵巢miRNA晶片的研究基礎上，篩選出差異表達的miR-93，並證實了PCOS卵巢皮質高表達miR-93。通過生物信息學的預測、螢光素酶報告和CDKN1A轉錄和翻譯水平的檢測，我們從多方面證明了CDKN1A為miR-93的下游靶基因。隨後，我們通過過表達miR-93，發現了其可促進顆粒細胞的增殖，該功能主要通過抑制CDKN1A起作用。接下來，我們進一步證明了高胰島素通過轉錄因子E2F1上調miR-93的表達，且該作用呈現胰島素劑量依賴性。綜上，本課題揭示了PCOS中高胰島素血症通過轉錄因子E2F1上調卵巢顆粒細胞miR-93的表達，從而抑制下游靶基因CDKN1A促進卵巢顆粒細胞增殖，部分解釋了PCOS卵巢多囊樣表現。 PCOS患者顆粒細胞除了增殖、凋亡存在變化，其分泌的抗苗勒氏管激素（AMH）水平也明顯升高。PCOS患者AMH水平升高不僅與小卵泡數目相關，還包括每個卵泡顆粒細胞分泌AMH水平升高，而調控AMH表達變化的機制不明。鑒於此，我們研究發現了雄激素可濃度依賴性上調顆粒細胞AMH的表達。我們進一步驗證了雄激素可濃度依賴性促進AR、p-STAT3與AMH的蛋白水平，而採用雄激素受體拮抗劑或者p-STAT3抑制劑可阻斷雄激素對p-STAT3、AMH的上調作用，證明了PCOS高雄激素通過STAT3信號通路促進顆粒細胞AMH的表達。 本課題揭示了PCOS兩大病理特徵高胰島素和高雄激素參與PCOS卵泡發育障礙的過程，胰島素通過轉錄因子上調miR-93表達，進而促進顆粒細胞的增殖；雄激素通過STAT3信號通路促進顆粒細胞AMH的表達。上述機制研究為闡明PCOS卵泡發育障礙提供了新的研究思路，為阻斷其病理進程提供了新線索，為發展新型基因治療藥物奠定基礎。
