組蛋白修飾檢測

組蛋白修飾檢測是指通過各種方法對組蛋白磷酸化、乙醯化、甲基化、泛素化等共價修飾水平進行分析。組蛋白共價修飾在真核細胞的染色質結構重塑和基因表達調控方面發揮著重要的作用，通過細胞組蛋白修飾檢測可區分出具有特殊組蛋白表型和臨床預後的癌症患者亞群，可以作為癌症患者預後及臨床治療反應的預測指標，有助於指導癌症患者輔助化療方案的選擇等。

基本介紹

• 中文名：組蛋白修飾檢測
• 釋義：通過各種方法對組蛋白磷酸化、乙醯化、甲基化、泛素化等共價修飾水平進行的分析

檢查前準備

向被檢測者解釋本操作的目的、方法等，消除顧慮；選取血液、其他體液或細胞進行檢測，如需要進行有創傷的操作則需要提前完善凝血功能測定等相關檢查。

操作方法

1.染色質免疫沉澱

染色質免疫沉澱是用於分析基因組特定區域染色質中組蛋白修飾狀態的實驗方法。首先用1%甲醛等能穿透細胞的可逆的化學交聯試劑將核小體中的組蛋白與DNA輕微交聯，分離染色質，用超聲處理儀切割DNA到平均3個核小體長度，用抗乙醯化或甲基化組蛋白的特異性抗體進行免疫沉澱，提取逆轉交聯後沉澱下來的DNA，PCR擴增特定的DNA片段，從而檢測特定基因相關染色質中組蛋白的修飾情況。

2.蛋白晶片技術

通常選用以特異性抗體為探針的抗體晶片和液相晶片，分別將特異性抗體探針固定到固相支持物或液相體系中的小球體基質上，分別與樣品雜交，通過特定的儀器檢測，可以對同一個樣品中的多個不同的分子同時進行檢測。其在蛋白學研究中具有微型化、集成化、高通量化等優點。

3.Western印跡

直接用乙醯化或甲基化組蛋白的特異性抗體檢測細胞或組織核蛋白中相應組蛋白的表達情況。

4.組蛋白乙醯化酶和去乙醯化酶活性的檢測

首先提取含有待檢測酶的核蛋白或純化的乙醯化酶和去乙醯化酶，與標記的底物分子反應，通過檢測轉化的標記底物來判斷酶活性。

臨床意義

組蛋白的修飾可以改變DNA-組蛋白的相互作用，使染色質的構型發生改變。組蛋白乙醯化修飾大多發生在H3、H4的賴氨酸殘基上，與活化的染色質構型相關聯；組蛋白甲基化修飾多發生在H3、H4的賴氨酸和天冬氨酸殘基上，與基因抑制及基因的激活相關，取決於被修飾的位置和程度；組蛋白磷酸化修飾多發生與絲氨酸殘基，一般與基因活化相關；組蛋白泛素化修飾則是碳端的賴氨酸修飾，啟動基因表達。