《細胞自噬在狂犬病病毒感染中的作用及調控機制研究》是依託山東大學，由鄭學星擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：細胞自噬在狂犬病病毒感染中的作用及調控機制研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：鄭學星
- 依託單位：山東大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
狂犬病是由狂犬病病毒引起的一種重要人獸共患傳染病。由於狂犬病病毒的致病和免疫逃避機制不詳，導致發病後無有效治療措施，病死率幾乎為100%。狂犬病病毒弱毒株和街毒株在中樞神經系統引起的病理損傷和免疫反應差異很大。研究發現，細胞自噬船兵故在多種病毒抹驗催的感染、複製、致病力和免疫反應方面發揮重要作用，但是尚不清楚細胞自噬與狂犬病病毒的相互關係。本項目擬以小鼠源神經細胞為模式細胞，研究狂犬病病毒弱毒株和街毒株能否誘導細胞自噬，自噬在兩種病毒感染和複製中的作用，以及分析自噬相關基因的表達和信號通路。擬以小鼠為模式動物，研究自噬在小鼠體內對狂犬病病毒弱毒株和街毒株的復您簽臘制、致病力和免疫應答的影響，探究自噬與兩種病毒相互作用的差異和調控機制。為進一步揭示狂犬病病櫻陵毒的刪拜汗致病和免疫逃逸機制及開發新型抗病毒藥物提供新的線索。
結題摘要
對RABV的研究已逾百年，但關於其致病機理仍櫃仔宙永無明確定論。有關RABV與宿主細胞相互作用方面的了解還很有限，特別是RABV感染後引起的宿主蛋白質整體變化水平及與之相關的失調的生物學功能整體研究進展較為緩慢。自噬是機體進化保守的一種胞內降解途徑，能夠將衰老的細胞器、有害的蛋白聚集體、錯誤摺疊蛋白等包裹至自噬體中，並通過與溶酶體融合實現內容物的降解。在我們的課題開始之初尚無RABV與自噬相互作用的報導，因此研究二者關係可為解析RABV致病機理提供重要依據。該項目分為兩部分進行研究：一、RABV感染誘導NA細胞自噬。該部分實驗中，選取小鼠神經瘤細胞（mouse neuroblastoma cell line，NA）為體外模型，通過透射電鏡觀察自噬體的超微結構、螢光顯微鏡觀察EGFP-LC3以及mRFP-GFP-LC3螢光斑點的聚集情況，並聯合套用western blot方法檢測自噬標記分子LC3-II和自噬底物p62的表達量等多種手段評估RABV強、弱毒株感染後NA細胞的自噬水平。結果顯示，RABV感染NA細胞後，胞內自噬體數量明顯增多，且實驗室致弱毒株SRV9誘導的自噬體的增多明顯高於標準攻擊毒株CVS-11株。綜上所述，RABV感染可以誘導自噬，且強、弱毒株之間存在差異。二、細胞自噬對RABV小鼠體內複製的影響。首先利用CCK-8試劑盒方法測定自噬調節劑處理後NA細胞的活性及利用RABV內化實驗測定自噬調節劑對RABV內化速率的影響，從而篩選出適用的自噬激動劑及抑制劑。接下來在RABV感染過程中以自噬調劑劑處理NA細胞，測定自噬活性改變對RABV複製的影響。此外，為排除藥物本身對細胞其他方面的影響，利用shRNA對自噬關鍵基因Beclin 1進行沉默後檢測下調自噬水平對RABV複製的影響。結果顯示，調劑細胞自噬對RABV在NA細胞上複製無影響。另外，該部分實驗亦對自噬調朵多射頁節劑對RABV在小鼠腦組織內複製的影響及對小鼠的致病毒性進行檢測。體內實驗結果表明，自噬激動劑可以在不影響病毒複製的情況下增加RABV對小鼠的致死性。
