增生性瘢痕的自噬作用及p53對自噬調節機制的探討

《增生性瘢痕的自噬作用及p53對自噬調節機制的探討》是依託中國人民解放軍第四軍醫大學，由石繼紅擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：增生性瘢痕的自噬作用及p53對自噬調節機制的探討
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：石繼紅
• 依託單位：中國人民解放軍第四軍醫大學

中文摘要

傷口癒合過程中細胞增殖與凋亡的失衡是增生性瘢痕形成的重要原因之一，而自噬作為一種新的細胞凋亡方式，在多種疾病的發生過程中具有重要作用。前期我們的研究表明增生性瘢痕組織中自噬基因LC3和Beclin1的mRNA及蛋白表達水平明顯降低，證實了在增生性瘢痕組織中細胞的自噬功能受到顯著抑制，而自噬在增生性瘢痕發生過程中所起的作用及其作用機制目前尚缺乏研究。文獻及我們的研究表明p53對細胞自噬具有重要調節作用，但p53對自噬的調控機制尚未明了。基於此，本研究擬 ①分析增生性瘢痕組織及離體培養細胞中關鍵自噬基因、p53基因及蛋白的表達水平；②探討p53對細胞自噬靶點基因的調節機制；③利用兔耳瘢痕模型驗證瘢痕組織的自噬功能及p53對細胞自噬的調節作用。該研究將明確自噬功能減弱是增生性瘢痕形成的一個關鍵因素；初步闡明p53對瘢痕組織中細胞自噬的調控機制；為增生性瘢痕的預防、治療及藥物篩選提供理論指導。

結題摘要

增生性瘢痕（hypertrophic scar，HS）是一種嚴重的皮膚纖維化疾病，其特徵是過度的細胞增殖以及胞外基質的過度沉積，成纖維細胞的非正常激活是增生性瘢痕產生的重要病理性原因。前期我們的研究證實增生性瘢痕成纖維細胞（HS fibroblasts，HSFs）自噬功能異常與HS的形成及纖維化密切相關。但是哪些分子，如何調節HSFs尚不明確。為此，我們研究野生型p53（wtp53）對如何通過自噬性HSFs細胞凋亡抵抗HS的形成及纖維化。Western blotting結果表明：wtp53過表達（Adp53）能夠明顯促進感染HSFs的自噬活性，抑制膠原蛋白Col 1，Col 3及α-SMA的表達。而LC3過表達（AdLC3）對Col 1，Col 3及α-SMA的表達均無影響，相反，沉默LC3（shLC3）能夠明顯抑制HSFs細胞中Col 1及Col 3的表達，而不影響α-SMA的表達。Adp53調控的自噬表明依賴於Bcl-2和Bcl-xL分子, 而調控的自噬AdLC3僅僅依賴於分子Bcl-xL。流式細胞結果顯示沉默Bcl-2（sibcl-2）及Bcl-xL（sibcl-xL）能夠顯著增加HSFs細胞的凋亡。因此，HSFs修飾的自噬及自噬性凋亡經由Bcl-xL來抑制胞外基質的的沉積。重要的是：注射重組腺病毒Adp53, AdLC3, shLC3及干擾RNA的sibcl-2，sibcl-xL均都能夠改善兔耳瘢痕模型的外觀、膠原排列的結構，減輕瘢痕的形成。這些結果進一步證實修飾HSFs細胞自噬及自噬性HSFs細胞凋亡經由分子Bcl-xL。可見，Bcl-xL可以作為HS治療的潛在分子靶點，成為新的治療策略。