《死亡相關蛋白激酶蛋白降解調控通路的研究》是依託福建師範大學，由林堯擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：死亡相關蛋白激酶蛋白降解調控通路的研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：林堯
- 依託單位：福建師範大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
死亡相關蛋白激酶 (DAPK-1) 是一種絲氨酸-蘇氨酸激酶，在細胞凋亡、自噬、增殖等生理過程中具有重要作用。DAPK-1蛋白同時受到了蛋白酶體與溶酶體降解通路的雙重調控，但目前對其調控機制的研究僅限於蛋白酶體通路中的E3上。本項目將利用泛素或類泛素小分子E1和E2的siRNA庫，探尋影響DAPK-1蛋白降解的新信號通路及其作用機制，同時也將研究蛋白酶體與溶酶體兩條蛋白降解通路之間的互動（crosstalk）。此外DAPK-1基因的甲基化及隨之而來的mRNA表達缺失在許多癌症中都有報導，但對與之相關的蛋白表達卻所知甚少。我們將在慢性淋巴白血病的原發性癌症樣本中考查DAPK-1的蛋白表達，並與其mRNA表達進行對比，探討蛋白降解通路在癌症中對抗癌基因表達調控的重要性。我們的研究將有助於更全面地理解DAPK-1蛋白的降解，完善其分子調控網路，並為DAPK-1在癌症中的表達調控提供更深入的理解。
結題摘要
死亡相關蛋白激酶 (Death Associated Protein Kinase 1，DAPK-1) 是一種在細胞凋亡 、自噬 、增殖等過程中具有重要作用的絲氨酸-蘇氨酸激酶。DAPK蛋白降解同時受到泛素-蛋白酶體途徑和溶酶體途徑的雙重調控。申請者前期研究表明UBE2I (又名UBC9，為類泛素小分子蛋白sumo-1 (Small Ubiquitin Like Molecule 1) E2)可以調節TSC2介導的DAPK降解。當SUMO信號通路被激活時，DAPK蛋白的表達下調；當SUMO信號通路被抑制時，DAPK蛋白的表達上調，而TSC2蛋白(Tuberous Sclerosis)引導的DAPK蛋白降解受到了抑制。本項目在前期基礎上利用了點突變技術構建DAPK的缺失突變體。發現SUMO特異性蛋白酶（SENPs）引導DAPK蛋白的穩定性，是通過DAPK蛋白的1-364區實現的。通過軟體預測DAPK的SUMO化位點，構建點突變體，發現SUMO信號通路調控DAPK蛋白的表達是依賴於DAPK第141位和167位的賴氨酸殘基。實驗發現蛋白酶體抑制劑MG132 或共轉SENP6均能明顯提高DAPK蛋白的表達。同時半衰期實驗結果顯示MG132能延長DAPK蛋白的半衰期，但是DAPK兩個點突變位點載體DAPK (K141A and K167A) 對其半衰期並無影響。因此SUMO信號通路調控DAPK蛋白的表達可能是通過溶酶體途徑降解來實現的。此外，蛋白的表達除受到降解和翻譯的調控，還受到mRNA的調控。DAPK基因甲基化與多種癌症的臨床病理特徵相關，本項目通過檢測乳腺癌患者組織的DAPK基因甲基化水平、蛋白表達量、mRNA表達量，發現DAPK基因甲基化與DAPK蛋白表達量和mRNA表達量之間並沒有相關性。檢測DAPK在肝癌細胞中的表達，結果顯示DAPK與肝癌患者血清檢測到的AFP(甲胎蛋白)具有顯著相關性，同時DAPK和肝癌患者的生存率也密切相關。 DAPK作為一個潛在的藥物靶點正受到越來越多的重視。本研究發現SUMO信號通路可以調控DAPK蛋白的表達且其調控可能是通過溶酶體途徑降解實現的。且在乳腺癌組織中DAPK基因甲基化與DAPK蛋白表達量和mRNA表達量之間並沒有相關性。這有助於我們更加全面深入地了解DAPK蛋白的降解調控，有助於開發與DAPK蛋白相關的新藥。
