《蛋白激酶SRPK1通過PI3K/Akt信號通路調控肝癌發生的分子機制》是依託同濟大學，由李硯東擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：蛋白激酶SRPK1通過PI3K/Akt信號通路調控肝癌發生的分子機制
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：李硯東
- 依託單位：同濟大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
剪接因子蛋白激酶SRPK1在腫瘤的發生髮展過程中扮演重要角色，目前對其作用機制的研究主要集中在其對下游信號分子的選擇性剪接調控上。本課題組新近發現，SRPK1能夠激活PI3K/Akt信號通路核心組分Akt蛋白活性促進肝癌發生。進一步分析發現SRPK1和PI3K的p110α亞基存在相互作用和共定位，同時利用免疫共沉澱和質譜聯用的方法篩選到一個和SRPK1相互作用的轉錄因子YBX-1，該因子能夠被Akt磷酸化而發揮致癌作用。基於以上結果，我們構想PI3K/Akt信號轉導通路可能介導了SRPK1的致癌作用。本項目擬繼續深入研究SRPK1如何通過結合p110α而激活Akt，SRPK1與YBX-1的結合是否促進YBX-1的致癌效應以及這一結合是否受到PI3K/Akt信號調控。該項目的完成，將第一次闡明SRPK1促進腫瘤發生的一種不依賴於選擇性剪接的新的分子機制，為篩選抗癌藥物提供理論依據。
結題摘要
蛋白激酶SRPK1是一種具有RS串聯結構的剪接因子激酶，其在腫瘤的發生髮展過程中扮演重要角色。已發現SRPK1在包括肝癌，前列腺癌，乳腺癌，肺癌，膠質瘤等多種腫瘤中過表達，其主要發揮促癌作用，但其促癌機制不明。本項目研究結果發現，SRPK1能夠激活PI3K/Akt信號通路核心組分Akt蛋白活性並且該激活不依賴於SRPK1的激酶活性。進一步分析發現SRPK1和PI3K的p110α亞基存在相互作用和共定位，推測SRPK1通過和p110α結合而活化PI3K進而激活Akt。此外運用免疫共沉澱和質譜聯用的方法篩選到一個和SRPK1相互作用的轉錄因子YB-1，該因子能夠被Akt磷酸化而發揮致癌作用。我們通過免疫共沉澱實驗驗證了SRPK1和YB-1相互結合併發現二者在細胞記憶體在共定位。分段構建不同區段的蛋白檢測它們之間的相互結合，發現任何部位的缺失都不能使SRPK1和YB-1甚至p110α發生相互作用，說明SRPK1全長蛋白的重要性。此外，Western blot結果顯示過表達SRPK1促進Akt的磷酸化，也促進YB-1的磷酸化，說明SRPK1不僅能夠活化Akt信號，也能夠活化YB-1，使其入核發揮轉錄調控作用。在細胞學功能上，在RNAi降低YB-1表達水平條件下，過表達SRPK1對細胞增殖和遷移的促進作用明顯減弱，暗示SRPK1對細胞增殖和遷移的調控是YB-1依賴性的。在裸鼠皮下成瘤實驗中YB-1或SRPK1的knockdown顯著減弱瘤體的生長，免疫組化結果揭示兩個基因konckdown組微血管密度明顯少於對照組，證實YB-1同SRPK1類似，影響新生血管形成。在臨床關聯上，SRPK1和YB-1在肝癌組織中均表達上升，與病人一定的臨床病理參數存在統計學意義。我們的研究結果第一次闡明SRPK1/Akt/Yb-1信號通路在肝癌發生中的作用，為篩選抗癌藥物研發提供理論依據。
