《基於DNA介導蛋白鄰近重構的核酸快速分析新方法》是依託湖南大學，由聶舟擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：基於DNA介導蛋白鄰近重構的核酸快速分析新方法
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：聶舟
- 依託單位：湖南大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
近年來隨著高通量篩查與臨床即時診斷的迅速發展，對核酸感測提出了兼具高靈敏與簡便快速的新要求。針對這一要求，本項目擬將核酸-蛋白偶聯技術與片段蛋白重組技術結合起來，提出DNA介導蛋白鄰近重構（簡稱DPPR）的核酸檢測新原理。該原理基於分子生物學技術製備報告蛋白（酶或螢光蛋白）片段，並將報告蛋白片段與DNA探針進行偶聯，通過DNA探針或核酸適體等功能核酸探針的分子識別行為，介導蛋白片段發生鄰近重組、功能恢復並產生信號。在此原理基礎上，根據報告蛋白與酶底物分子的不同分別建立多種新型的可視、螢光及電化學感測技術，並發展具有DPPR特徵的核酸放大新技術。該課題將核酸探針的強大生物識別功能、酶催化信號放大的高靈敏度、以及片段蛋白重組對於生物相互作用的高特異性、免分離、均相檢測的特點相融合，以期建立起多種適合核酸快速檢測的超敏分析新方法。
結題摘要
近年來隨著高通量藥物篩選和臨床實時診斷技術的迅速發展，對於核酸及蛋白感測提出了兼具高靈敏與簡便快速的新要求。針對這一需求，本課題擬發展片段蛋白互補技術與核酸-多肽偶聯技術及相關生物感測方法，以期將兩者進一步結合發展基於DNA介導蛋白重構的生物感測新原理。本課題完成了超摺疊綠色螢光蛋白片段蛋白互補體系的構建，並基於此體系構建了蛋白激酶的無標記分析新方法。進一步在超摺疊綠色螢光蛋白基礎上進行分子改造，構建了超電荷螢光蛋白體系用於生物感測，發展了多種核酸修飾及蛋白翻譯後修飾及相關酶的檢測新方法。同時詳細研究了DNA-多肽偶聯物的製備條件及流程，通過點擊化學偶聯及巰基-氨基雙偶聯方法成功獲得穩定且高產率的DNA-多肽偶聯物。並利用DNA模板化Click偶聯發展了多種生物感測新方法，還發展了多種核酸感測及可控自組裝新方法用於多輸入邏輯門構建及DNA-蛋白相互作用檢測。進一步的DNA介導蛋白重構相關研究工作仍在進行當中。以上工作均具有高特異性及靈敏度，步驟簡單快速、免分離、均相檢測的等特點，將為建立具有快速檢測特點的超敏生物分析新方法提供堅實基礎。
