《基於三螺旋DNA的免疫-PCR新分析方法研究》是依託中山大學，由凌連生擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：基於三螺旋DNA的免疫-PCR新分析方法研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：凌連生
- 依託單位：中山大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
很多蛋白質是一些癌症和傳染性疾病的標誌物，而它們的濃度在疾病發展的早期階段非常低。因此在後基因組時代，建立和發展蛋白質的超高靈敏的檢測方法顯得極為重要。 本項目擬將螢光探針Ru-dppz配合物類發光探針用於檢測PCR產物，並將這些探針用於免疫-PCR分析，提高免疫-PCR技術的靈敏度。探索各種基於三螺旋DNA 形成原理的雙螺旋DNA 序列識別分析新方法，並將新方法用於PCR產物檢測；進一步與免疫-PCR技術相結合，建立基於三螺旋DNA的免疫-PCR新分析方法。將新建立的免疫-PCR 分析方法推廣用於不同疾病抗原的檢測，發展和建立不同疾病抗原的高靈敏檢測方法。
結題摘要
我們採用二茂鐵修飾的分子信標為探針，根據三螺旋DNA的形成原理建立序列識別雙螺旋DNA的電化學感測器。與雜交鏈反應放大(HCR)技術相結合,提高檢測雙鏈DNA的靈敏度。將三螺旋DNA的序列識別能力與鏈置換核酸等溫放大技術和核酸內切酶放大技術相結合，分別建立檢測SV40病毒和HIV病毒的螢光感測器，為SV40 和HIV病毒的檢測提供全新的方法。利用Ag+ 對CGC三鹼基體的識別和增穩作用，建立由Ag+/Cysteine調控的基於三螺旋DNA的邏輯門。進一步將HCR放大技術與三螺旋DNA相結合，實現對HCR過程的動態調控。以三螺旋DNA為樞鈕，將HCR放大技術和其他放大技術相結合，分別建立循環腫瘤DNA , lef7a miRNA和ATP的比色感測器。利用目標物誘導鄰近DNA雜交手段特異性識別目標分子，並通過鏈置換擴增反應對檢測信號循環地進行放大,分別建立鏈霉親合素和凝血酶的螢光感測器。基於DNA修飾的銀板的分離特性和金納米粒子放大效應的原子吸收光譜法特異性識別單鏈DNA。我們發明了一種多倍PCR 擴增方法（multi-fold PCR），使每個循環的擴增倍數大於2，突破現有的PCR技術的放大極限。利用聚合酶鏈式反應（PCR）擴增技術和三螺旋DNA的形成原理，建立了一種基於PCR-免疫的檢測凝血酶的螢光檢測法，線性範圍為1.0×10-12 mol/L - 1.0×10-7 mol/L，檢出限為261 fmol/L。根據適配體對凝血酶的特異性識別和GOx對葡萄糖的催化氧化，以2,3-二羥基-3-（4-羥基苯基）丙酸（HPPA）為探針，建立凝血酶的螢光感測器。
