金黃色葡萄球菌

金黃色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus ) 是人類的一種重要病原菌，隸屬於葡萄球菌屬（Staphylococcus），有“嗜肉菌"的別稱，是革蘭氏陽性菌的代表，可引起許多嚴重感染。而對於金黃色葡萄球菌在速凍食品中的存在量，衛生部於2011年11月24日公布食品安全國家標準《速凍面米製品》，允許金葡菌限量存在。

簡介

金黃色葡萄球菌，也稱“金葡菌”，細胞壁含90%的肽聚糖和10%的磷壁酸。其肽聚糖的網狀結構比革蘭氏陰性菌緻密，染色時結晶紫附著後不被酒精脫色故而呈現紫色，相反，陰性菌的細胞壁肽聚糖層薄、交聯度差，脂類含量高，所以紫色複合物被酒精衝掉然後附著了沙黃的紅色。金黃色葡萄球菌與青黴素的發現有很大的淵源。當年弗萊明就是在他的金黃色葡萄球菌的培養皿中發現有些球菌被殺死了，於是發現了青黴素。而研究也表明青黴素只對以金黃色葡萄球菌為代表的革蘭氏陽性菌作用明顯。這也是由肽聚糖層的厚度和結構造成的。

顯微圖像

新出現的耐甲氧西林金黃色葡萄球菌，被稱作超級細菌，幾乎能抵抗人類所有的藥物，但是萬古黴素可以對付它。典型的金黃色葡萄球菌為球型，直徑0.8μm左右，顯微鏡下排列成葡萄串狀。金黃色葡萄球菌無芽胞、鞭毛，大多數無莢膜，革蘭氏染色陽性。金黃色葡萄球菌營養要求不高，在普通培養基上生長良好，需氧或兼性厭氧，最適生長溫度37°C，最適生長pH7.4，乾燥環境下可存活數周。平板上菌落厚、有光澤、圓形凸起，直徑0.5~1.0mm。血平板菌落周圍形成透明的溶血環。金黃色葡萄球菌有高度的耐鹽性，可在10~15%NaCl肉湯中生長。可分解葡萄糖、麥芽糖、乳糖、蔗糖，產酸不產氣。甲基紅反應陽性，VP反應弱陽性。許多菌株可分解精氨酸，水解尿素，還原硝酸鹽，液化明膠。金黃色葡萄球菌具有較強的抵抗力，對磺胺類藥物、青黴素、紅黴素、土黴素、新黴素等抗生素敏感，但易產生耐藥性，原因是由於這些菌株產生青黴素酶等。對鹼性染料敏感，十萬分之一的龍膽紫液即可抑制生長。

金黃色葡萄球菌普通培養基培養特點

流行病學

金黃色葡萄球菌在自然界中無處不在，空氣、水、灰塵及人和動物的排泄物中都可找到。因此，食品受到污染的機會很多。美國疾病控制中心報告，由金黃色葡萄球菌引起的感染占第二位，僅次於大腸桿菌。金黃色葡萄球菌腸毒素是個世界性衛生難題，在美國由金黃色葡萄球菌腸毒素引起的食物中毒，占整個細菌性食物中毒的33%，加拿大則更多，占到45%，中國金黃色葡萄球菌引起的食物中毒事件也時有發生，比如2001年4月12日，無錫市錫山區所轄國小、幼稚園因課間加餐飲用袋裝牛奶飲料導致食物中毒事件。

金黃色葡萄球菌的流行病學一般有如下特點：季節分布，多見於春夏季；中毒食品種類多，如奶、肉、蛋、魚及其製品。此外，剩飯、油煎蛋、糯米糕及涼粉等引起的中毒事件也有報導。上呼吸道感染患者鼻腔帶菌率83%，所以人畜化膿性感染部位，常成為污染源。

金黃色葡萄球菌是人類化膿感染中最常見的病原菌，可引起局部化膿感染，也可引起肺炎、偽膜性腸炎、心包炎等，甚至敗血症、膿毒症等全身感染。金黃色葡萄球菌的致病力強弱主要取決於其產生的毒素和侵襲性酶：

a.溶血毒素：外毒素，分α、β、γ、δ四種，能損傷血小板，破壞溶酶體，引起肌體局部缺血和壞死

b.殺死白細胞素：可破壞人的白細胞和巨噬細胞

c.血漿凝固酶：當金黃色葡萄球菌侵入人體時，該酶使血液或血漿中的纖維蛋白沉積於菌體表面或凝固，阻礙吞噬細胞的吞噬作用。葡萄球菌形成的感染易局部化與此酶有關

d.脫氧核糖核酸酶：金黃色葡萄球菌產生的脫氧核糖核酸酶能耐受高溫，可用來作為依據鑑定金黃色葡萄球菌

e.腸毒素：金黃色葡萄球菌能產生數種引起急性胃腸炎的蛋白質性腸毒素，分為A、B、C1、C2、C3、D、E及F八種血清型。腸毒素可耐受100°C煮沸30分鐘而不被破壞。它引起的食物中毒症狀是嘔吐和腹瀉。此外，金黃色葡萄球菌還產生溶表皮素、明膠酶、蛋白酶、脂肪酶、肽酶等。

f .表皮剝脫毒素：引起燙傷樣皮膚綜合徵，又稱剝脫樣皮炎。

g.毒性休克綜合徵毒素（tsst-1）

引發病症

金黃色葡萄球菌腸炎是金黃色葡萄球菌引起的，多因原發疾病長期用抗生素引起腸道菌群失調所致，抗生素敏感菌株受到抑制，耐藥的金黃色葡萄球菌株趁機繁殖。金黃色葡萄球菌為侵襲性細菌，能產生毒素，對腸道破壞性大，所以金黃色葡萄球菌腸炎起病急，中毒症狀嚴重，主要表現為嘔吐、發熱、腹瀉。嘔吐常在發熱前出現，發熱很高。輕症大便次數稍多，為黃綠色糊狀便；重症大便次數頻繁，每日可達數十次，大便呈暗綠色水樣便，外觀像海水，所以叫海水樣便。粘液多，有腥臭味，有時可排出片狀偽膜，將偽膜放入生理水，脫落的腸黏膜即漂在水面上，對診斷幫助很大。體液損失多，患兒脫水、電解質紊亂和酸中毒嚴重，可發生休克。挑選大便粘液部分塗片，在顯微鏡下檢查可見大量膿細胞，如經革蘭氏染色，顯微鏡檢查可見成堆的大量革蘭氏陽性球菌。大便培養金黃色葡萄球菌生長，即可明確診斷。

球菌檢驗

第一，金黃色葡萄球菌的檢驗

樣品處理：無菌取25g或25mL食品樣品，放入225mL滅菌生理鹽水中均質，製成10-1稀釋液。

增菌培養：將10-1稀釋液接入7.5%NaCl肉湯或胰蛋白腖肉湯中，37°C培養24小時。

分離培養：將上述稀釋液或培養液分別劃線血平板和Baird-Parker平板，置37°C培養24~48小時。金黃色葡萄球菌在血平板上呈金黃或白色菌落，大而凸起，表面光滑，周圍有溶血圈。在Baird-Parker平板上菌落為圓形，直徑2~3mm，顏色灰或黑色，周圍有一渾濁帶。

染色觀察：從平板上挑取可疑性菌落進行革蘭氏染色，金黃色葡萄球菌為革蘭氏陽性，顯微鏡下呈葡萄狀排列無芽胞、莢膜，直徑0.5~1μm。

血漿凝固酶試驗：吸取0.5mL兔血漿與0.5mL金黃色葡萄球菌試液浸液肉湯24小時培養物充分混勻，置36±1°C培養，每隔半小時觀察一次，連續觀察6小時，出現凝固，即將小試管傾斜或倒置時，內容物不流動，判為陽性。同時做陰陽性對照。耐熱核酸酶試驗：將24小時肉湯培養物沸水浴處理15min，用接種環劃線刺種於甲苯胺蘭-DNA平板，36±1°C培養24小時，在刺種線周圍出現淡粉色者為陽性。本試驗金黃色葡萄球菌為陽性。

第二，金黃色葡萄球菌腸毒素檢測

金黃色葡萄球菌腸毒素的檢測主要有動物試驗、血清學試驗、免疫螢光試驗及酶聯免疫吸附等方法，在此就不一一贅述。

預防感染

第一，防止金黃色葡萄球菌污染食品

防止帶菌人群對各種食物的污染：定期對生產加工人員進行健康檢查，患局部化膿性感染（如疥瘡、手指化膿等）、上呼吸道感染（如鼻竇炎、化膿性肺炎、口腔疾病等）的人員要暫時停止其工作或調換崗位。對肉製品加工廠，患局部化膿感染的禽、畜屍體應除去病變部位，經高溫或其他適當方式處理後進行加工生 產。

第二，防止金黃色葡萄球菌腸毒素的生成

應在低溫和通風良好的條件下貯藏食物，以防腸毒素形成；在氣溫高的春夏季，食物置冷藏或通風陰涼地方也不應超過6小時，並且食用前要徹底加熱。

第三，殺死金黃色葡萄球菌

金黃色葡萄球菌對熱和乾燥的抵抗力較一般無芽胞細菌強，加熱80℃30分鐘才被殺死。 物體表面覆蓋一層0.1mg/cm3濃度的超細tio2在光照條件下可快速有效殺滅。在乾燥的膿汁、痰液中可存活2～3月。5%石炭酸中10～15分鐘死亡。對鹼性染料敏感，十萬分之一的龍膽紫液即可抑制其生長。

感染處理

由於MRSA（耐甲氧西林金黃色葡萄球菌） 的存在，一般不使用青黴素。所以有金黃色葡萄球菌感染者，可選用：紅黴素、新型青黴素、慶大黴素、萬古黴素或先鋒黴素Ⅵ治療。

治療事項

1、毛囊炎治療要注意飲食，不要吃辛辣刺激性食物，不能喝酒。

2、不可用手搔抓患處，以防繼發感染。

3、待症狀完全消失以後，鞏固1個療程。

限量存在

衛生部於2011年11月24日公布食品安全國家標準《速凍面米製品》（GB19295－2011）。在幾大速凍品牌食品因檢出金黃色葡萄球菌而下架的背景下，因有條件允許金葡菌限量存在，新國標引來議論紛紛。衛生部專家稱，新國標更加科學合理，並沒有降低要求。

這個新國標是根據《食品安全法》及其實施條例規定，由衛生部在原《速凍預包裝面米食品衛生標準》（GB19295－2003）實施基礎上組織制定的，將於2011年12月21日起正式施行。

傳播途徑

一般來說，金黃色葡萄球菌可通過以下途徑污染食品：食品加工人員、炊事員或銷售人員帶菌，造成食品污染；食品在加工前本身帶菌，或在加工過程中受到了污染，產生了腸毒素，引起食物中毒；熟食製品包裝不嚴，運輸過程受到污染；奶牛患化膿性乳腺炎或禽畜局部化膿時，對肉體其他部位的污染。

培養方式

甘露醇高鹽瓊脂可用於金黃色葡萄球菌的選擇性分離培養

蛋白腖和牛肉粉提供氮源、維生素和生長因子；D—甘露醇為可發酵糖類；氯化鈉維持均衡的滲透壓；瓊脂是培養基的凝固劑；酚紅為pH指示劑。

檢測方法

材料與方法

1、材料
①培養基：7.5%NaCl肉湯培養基，血瓊脂平板培養基（按常規方法製作）
②試劑：7.5%NaCl肉湯培養基，革蘭氏染色，血瓊脂平板，Baird-Parker瓊脂平板，生理鹽水，兔血漿（1：4）
③器材：溫箱，顯微鏡，天平，均質器，載玻片，L型塗片棒，三角瓶，刻度吸管，平皿，試管及試管架，研磨，1ml注射器，
④實驗動物：健康的小白鼠
2、方法
待檢樣品25g+225ml 滅菌生理鹽水
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直接計數法 增菌培養方法
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Baird-Parker瓊脂平板 7.5%NaCl肉湯培養基
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血平板 血平板
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塗片染色鏡 溶血觀察　動物接種試驗 血漿凝固試驗
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報告

實驗步驟

1、樣品的採集
稱取25g火腿腸，切碎攪勻（用滅菌研缽研磨），置於250ml 錐形瓶中，加入225ml 滅菌生理鹽水，製成1：10樣品混懸液，混勻後作用20分鐘，隨機取10ml 離心。
2、增菌及分離培養
①增菌培養方法：吸取5ml上清液，接種於7.5%NaCl肉湯培養基內，置於（37±1℃）恆溫箱中培養24h，劃線接種入血平板，（37±1℃）恆溫箱中培養24h。
②直接計數方法：吸取上述懸液，進行10倍遞增稀釋，根據樣品污染情況，選擇不同濃度的稀釋液各1ml，分別加入3個Baird-Parker瓊脂平板，每個平板的接種量分別為0.3ml、0.3ml、0.4ml。用滅菌L型塗布棒塗布整個平板，置於（37±1℃）恆溫箱中培養24h。之後分別對3個平板上生長的周圍有渾濁帶的黑色菌落進行計數。轉接入血平板，（37±1℃）恆溫箱中培養24h。
3、塗片、染色與鏡檢
將純培養的未知菌塗片，革蘭氏染色，顯微鏡觀察。
4、生化實驗
①觸酶試驗
在載玻片上滴1滴3%的過氧化氫，調取純化的細菌放在過氧化氫中觀察變化。30s內產生大量氣泡者為陽性，不產生氣泡者為陰性。
②血漿凝固酶試驗
吸取1：4新鮮兔血漿0.5ml，放入小試管中，再加入培養24h的2①中的肉湯培養液0.5ml，搖盪均勻，放入（37±1℃）恆溫箱中培養，每0.5h觀察一次，觀察6h，檢查是否出現凝固。將試管傾斜或倒置時，呈現凝塊狀，可判定為陽性，同時以已知陽性葡糖球菌和陰性肉湯作為對照。
5、動物感染實驗
用無菌生理鹽水將2①中血瓊脂板上純化的菌落洗下後，以0.5ml/只腹腔注射入小白鼠體內，同時用滅菌生理鹽水注射入另外的小白鼠體內，以做對照，分別在相同條件飼養，觀察其症狀。對感染試驗出現症狀或死亡的小白鼠進行剖檢，並採集病料，進行分離。

結果與分析

1、培養特性及形態特徵
①培養特性
在37℃條件下，需氧與厭氧培養的血液營養瓊脂平板均長出光滑、濕潤、隆起，約1mm大小的金黃色菌落，並且有β溶血現象。
②鏡檢結果
顯微鏡下觀察該菌為革蘭氏陽性球菌，排列成葡萄串狀，也有個別2個或3個球菌相連。根據菌落形態、鏡檢結果懷疑該菌為葡萄球菌。
2、菌落計數報告
將直接計數法試驗中的3個平板中疑似黑色葡萄球菌的金黃色菌落數相加，乘以血漿凝固酶試驗陽性數，除以5，在乘以稀釋倍數，即為每克樣品中金黃色葡萄球菌數量。
3、動物感染試驗
只注生理鹽水的小白鼠沒有任何變化：接種分離菌的小白鼠在9h內死亡。將死亡的小白鼠剖檢採集病料，進行細菌分離和生化試驗，得到與原分離菌。

“金球菌”列為“極重要質量項目”

金黃色葡萄球菌因思念、三全、灣仔碼頭事件而引發標準爭議，在2011年12月21日實施的速凍食品新國標中，金黃色葡萄球菌從原來“不得檢出”變為“限量檢出”，但這一檢測標準的改變並不代表可以忽略金黃色葡萄球菌的危害性。

在市質監局徵集意見而公示的抽檢項目中查詢到，對包括速凍水餃、湯圓、包子、花捲、饅頭、南瓜餅、八寶飯等在內的速凍米麵食品，仍然計畫把金黃色葡萄球菌列入A類檢驗項目，並標註為“極重要質量項目”，同時速凍米麵食品的沙門氏菌也是A類檢驗。

產品檢出“金球菌”屬嚴重不合格

市質監局介紹，速凍面米抽檢中，金黃色葡萄球菌也是A類檢驗項目。如果食品檢驗項目中任一項或一項以上不符合規定的要求，判定為不合格；當產品存在A類項目不合格時，屬於嚴重不合格；僅有B類項目不合格，屬於一般不合格。

同時，在嬰幼兒奶粉、蛋製品中，三聚氰胺、蘇丹紅也是同樣的A類。為避免一些肉禽食品可能含瘦肉精，此次在肉禽罐頭食品中，還有專門針對瘦肉精的檢測。

速凍食品“金球菌”可限量檢出

中國現行《速凍預包裝面米食品衛生標準》（GB19295－2003）規定金黃色葡萄球菌等致病菌不得檢出。

而衛生部於2012年12月21日實施的《速凍面米製品食品安全國家標準》，將金黃色葡萄球菌檢測由定性轉向定量，規定每批產品抽檢5個樣品中，至多只能有1個樣品每克生製品中檢出的金黃色葡萄球菌含量在1000至10000個之間。