培養
操作方法
根據標準要求或對污染情況的估計,選擇2~3個適宜稀釋度,分別在制10倍遞增稀釋的同時,以吸取該稀釋度的吸管移取1ml稀釋液於滅菌平皿中,每個稀釋度做兩個平皿。將涼至46℃營養瓊脂培養基注入平皿約15ml,並轉動平皿,混合均勻。同時將營養瓊脂培養基傾入加有1ml
稀釋液(不含樣品)的滅菌平皿內作空白對照。待瓊脂凝固後,翻轉平板,置36±1℃溫箱內培養48±2h,取出計算平板內菌落數目,乘以
稀釋倍數,即得每克(每毫升)樣品所含
菌落總數。
操作要點
1.傾注用培養基應在46℃水浴內保溫,溫度過高會影響細菌生長,過低瓊脂易於凝因而不能與菌液充分混勻。如無水浴,應以皮膚感受較熱而不燙為宜。傾注培養基的量規定不一,從12~20ml不等,一般以15ml較為適宜,平板過厚可影響觀察,太薄又易於乾裂。傾注時,培基底部如有沉澱物,應將底部棄去,以免與菌落混淆而影響計數觀察。
2.為使菌落能在平板上均勻分布,檢液加入平皿後,應儘快傾注培養基並旋轉混勻,可正反兩個方向旋轉,檢樣從開始稀釋到傾注最後一個平皿所用時間不宜超過20min,以防止細菌有所死亡或繁殖。
3.培養溫度一般為37℃(水產品的培養溫度,由於其生活環境水溫較低,故多採用30℃)。培養時間一般為48h,有些方法只要求24h的培養即可計數。培養箱應保持一定的濕度,瓊脂
平板培養48h後,培養基失重不應超過15%。
4.為避免食品中的微小顆粒或培基中的雜質與細菌菌落髮生混淆,不易分辨,可同時作一稀釋液與瓊脂培基混合的平板,不經培養,而於4℃環境中放置,以便計數時作對照觀察。在某些場合,為了防止食品顆粒與菌落混淆不清,可在營養瓊脂中加入
氯化三苯四氮唑(TTC),培養後菌落呈紅色,易於分別。
注意事項
1. 操作要快而準,包括材料、加樣、倒培養基。
2. 吸液體時液體不能進入吸頭。
3. 樣品稀釋時一定要混勻。
4. 倒培養基前,瓶口要過火焰。
5. 一定要有空白對照。
6. 培養基溫度控制,培養基薄厚。
7. 檢測時一定要使平皿完全暴露於空氣中。
特徵和形態
菌落形態包括菌落的大小、形狀、邊緣、光澤、質地、顏色和透明程度等。每一種細菌在一定條件下形成固定的菌落特徵。不同種或同種在不同的培養條件下,菌落特徵是不同的。這些特徵對
菌種識別、鑑定有一定意義。
細胞形態是菌落形態的基礎,菌落形態是細胞形態在群體集聚時的反映。細菌是原核微生物,故形成的菌落也小;細菌個體之間充滿著水分,所以整個菌落顯得濕潤,易被接種環挑起;球菌形成隆起的菌落;有
鞭毛細菌常形成邊緣不規則的菌落;具有
莢膜的菌落表面較透明,邊緣光滑整齊;有芽孢 的菌落表面乾燥皺褶;有些能產生色素的細菌菌落還顯出鮮艷的顏色。
大腸桿菌在普通瓊脂
培養基上面都是一樣的,圓形邊緣整齊,表面光滑,半透明,小凸起;典型的大腸桿菌在伊紅美藍瓊脂平板上的特徵為:深紫黑色、光滑、濕潤、帶有金屬光澤的圓形菌落。