15聯呼吸道病毒螢光標記PCR檢測試劑盒，是一種用來檢測疾病的診斷試劑。
基本介紹
- 中文名：15聯呼吸道病毒螢光標記PCR檢測試劑盒
- 針對病症：流行性感冒病毒和流行性感冒病等
- 混合反應：分成三組進行PCR
- 國內推出：2012年12月在國內市場推出
- 保存溫度：-20℃
- 注意事項：應儘量避免反覆凍融
產品簡介,附屬檔案,
產品簡介
試劑盒針對流行性感冒病毒A型和流行性感冒病毒B型（FluA和FluB）、呼吸道合胞病毒A（RSVA）和呼吸道合孢病毒B（RSVB）、腺病毒（AdV）、人偏肺病毒（MPV）、冠狀病毒OC43（OC43）、冠狀病毒229E/NL63（229E/NL63）、副流感病毒1型（PIVl）、副流感病毒2型（PIV2）、副流感病毒3型（PIV3）、副流感病毒4型（PIV4）、鼻病毒A/B/C（HRV）、腸道病毒（HEV）、和人博卡病毒1/2/3/4（HBoV）共15種常見呼吸道病毒進行檢測。可以套用於季節性呼吸道疾病的病原學檢測，突發疫情狀態下的疫源病原體的排除檢測，結核病人的伴隨呼吸道病原體感染檢測，免疫低下患者的呼吸道病原體機會感染檢測以及區域網路病原體監測等場合。
該試劑盒針對各型病原體設計了獨特的擴增引物，分成三組進行PCR混合反應，避免了多重反應相互之間的干擾，同時每組反應內部加設內參照，可以區分真實陰性反應或者由於反應體系不正確導致的假陰性反應。PCR體系中採用Premix技術，預混合液中直接含有rTaq、反應Buffer、dNTP 等，加入模板即可進行反應。
PCR引物中還設計了獨特的螢光標記物，產物可經由目前普及使用的ABI3730測序儀進行儀器性的圖譜判讀，避免了人眼識別的經驗差異的干擾。在有經驗的實驗室內，各組PCR產物也可以直接進行瓊脂糖凝膠電泳，經EB染色後，直接在紫外下觀察和記錄結果，本手冊中也描述了這樣的流程。
該試劑盒由“博易醫學”研發，目前已經過臨床初步驗證，檢測靈敏度高，比國際同類產品質量相當，價格僅為其幾分之一，可在國內多數場合被接受套用。預計於2012年12月在國內市場推出。
附屬檔案
15聯呼吸道病毒螢光標記PCR檢測試劑盒
（BE-R15FPCRVersion 1.0, 50次量）
套用範圍
流行性感冒病毒A型(FluA)流行性感冒病毒B型(FluB)呼吸道合胞病毒A (RSVA)呼吸道合孢病毒B (RSVB)腺病毒(AdV)人偏肺病毒(MPV)冠狀病毒OC43 (OC43)冠狀病毒229E/NL63 (229E/NL63)副流感病毒1型(PIVl)副流感病毒2型(PIV2)副流感病毒3型(PIV3)副流感病毒4型(PIV4)鼻病毒A/B/C (HRV)腸道病毒(HEV)人博卡病毒1/2/3/4 (HBoV)腺病毒Adv：可以檢測大部分的B、C、E亞群和部分A、D亞群。
檢測原理
本試劑盒針對流行性感冒病毒A型和流行性感冒病毒B型（FluA和FluB）、呼吸道合胞病毒A（RSVA）和呼吸道合孢病毒B（RSVB）、腺病毒（AdV）、人偏肺病毒（MPV）、冠狀病毒OC43（OC43）、冠狀病毒229E/NL63（229E/NL63）、副流感病毒1型（PIVl）、副流感病毒2型（PIV2）、副流感病毒3型（PIV3）、副流感病毒4型（PIV4）、鼻病毒A/B/C（HRV）、腸道病毒（HEV）、和人博卡病毒1/2/3/4（HBoV）設計了獨特的擴增引物，分成三組進行PCR混合反應，避免了多重反應相互之間的干擾，同時每組反應內部加設內參照，可以區分真實陰性反應或者由於反應體系不正確導致的假陰性反應。
PCR體系中採用Premix技術，預混合液中直接含有rTaq、反應Buffer、dNTP 等，加入模板即可進行反應。
PCR引物中還設計了獨特的螢光標記物，產物可經由目前普及使用的ABI3730測序儀進行儀器性的圖譜判讀，避免了人眼識別的經驗差異的干擾。
在有經驗的實驗室內，各組PCR產物也可以直接進行瓊脂糖凝膠電泳，經EB染色後，直接在紫外下觀察和記錄結果，本手冊中也描述了這樣的流程。
試劑組成（50次量）
PCR Premix* | 500 μl × 3 |
Primer Mix A（2 pmol/μl） | 30 μl × 2 |
Primer Mix B（2 pmol/μl） | 30 μl × 2 |
Primer Mix C（2 pmol/μl） | 30 μl × 2 |
Marker | 100 μl × 1 |
Negative control（sterilize water） | 45 μl |
*PCR Premix中含有rTaq、反套用Buffer、dNTP Mixture等，應儘量避免反覆凍融。
保存溫度
-20℃保存，應儘量避免反覆凍融。
注意事項
本產品用於實驗室研究。本檢測適用於人鼻咽拭子（鼻腔擦拭液）、鼻咽分泌物和支氣管肺泡灌洗液樣本。實驗過程中應使用一次性耗材，以防污染。PCR Premix中含有rTaq，應儘量避免反覆凍融。背景信息
呼吸道感染病原學複雜，包括細菌、病毒、支原體、衣原體、真菌等，其中80%以上是病毒性的。該病四季、任何年齡均可發病，通過含有病毒的飛沫、霧滴，或經污染的用具進行傳播。常於機體抵抗力降低時，如受寒、勞累、淋雨等情況，原已存在或由外界侵入的病毒或/和細菌，迅速生長繁殖，導致感染，一般5-7天痊癒。常繼發支氣管炎、肺炎、副鼻竇炎，少數人可並發急性心肌炎、腎炎、風濕熱等。呼吸道感染是世界範圍內低齡兒童（<5歲）死亡的首位原因，每年可造成約5百萬兒童死亡。兒童上呼吸道感染的患病次數平均為3-8次/年，下呼吸道感染率比URTI低，在1歲兒童中感染的比例約1~3%，學齡兒童至5%~10%。呼吸道病毒習慣上是指侵害呼吸道的病毒，至少涉及到8個科，200多種型別的病毒。臨床常見的可導致呼吸道感染的病毒有腺病毒(AdV)、甲型流感病毒(FluA和FluB)、呼吸道合胞病毒(RSV)，人偏肺病毒(MPV)、副流感病毒1-4型(PIvll-PIV4)、鼻病毒(HRV)、冠狀病毒(OC43、229E/NL63)、腸道病毒(HEV)和人博卡病毒(HBoV)等。
腺病毒（AdV） 腺病毒（familyAdenoviridae）是一種沒有包膜的直徑為70～90 nm的顆粒，線狀雙鏈DNA病毒。分為兩個屬，6個亞群（A-F），包括51個血清型。腺病毒可通過人、水、媒介物和器械傳播, 室溫條件下, 腺病毒在污物中存在周期可延長至3周。腺病毒在兒童和軍營人員中更易發生感染和大規模流行, 大多數嬰幼兒在出生後的5年內至少感染過1種腺病毒株。該病毒可導致肺炎、發熱上呼吸道疾病、結膜炎、膀胱炎、腸胃炎等，根據感染者的免疫和心肺功能的不同可導致嚴重的呼吸窘迫甚至死亡。ADV感染全年散發，冬春季相對較多，陽性檢出率最高可達15%。
甲型流感病毒和乙型流感病毒(FluA和FluB) 流感病毒（familyOrthomyxoviridae）主要包括內部的核心和外部的病毒囊膜，核心是由核蛋白捲曲包繞螺旋形RNA組成，核蛋白的抗原穩定，很少發生變異，具有型特異性。根據核蛋白抗原性的不同，將流感病毒分甲( A) 、乙( B) 、丙( C) 三型，三型病毒具有相似的生化和生物學特徵。豬和禽類可攜帶甲型流感，乙、丙型流感僅在人之間轉播。甲型和乙型流感的臨床症狀相似，但是甲型流感病毒導致的住院率四倍於乙型流感病毒。乙型流感通常有肌炎及胃腸道症狀。丙型流感很少有下呼吸道症狀，但偶爾會造成上呼吸道疾病。可引起急起高熱、顯著乏力，全身肌肉酸痛，而鼻塞、流涕和噴嚏等上呼吸卡他症狀相對較輕。本病具有自限性，但在嬰幼兒、老年人和存在心肺基礎疾病的患者容易並發肺炎等嚴重併發症而導致死亡。一般出現於冬季，北半球通常在1、2月份達到高峰，南半球的流行時間較晚，熱帶地區可常年發病。世界性大流行常有2～3個流行波，一般流行3～4周會自然停止。世界衛生組織估計北半球每年1億人感染流感，5000萬次就診，30萬次住院，主要是高危人群和老年人，每年1萬人死於流感，主要是虛弱的老年人。
呼吸道合胞病毒(RSV)呼吸道合胞病毒（family Paramyxoviridae）是一種RNA病毒。多見於新生兒和6 個月以內的嬰兒，可由空氣飛沫和密切接觸傳播，潛伏期3～7日，傳染性強。套用單克隆抗體可將RSV分為A、B兩個亞型,有文獻報導RSV A亞型感染起病急,病情重; B亞型感染病情相對較輕。RSV是世界各地嬰幼兒病毒性肺炎和毛細支氣管炎的主要病原體之一，嚴重威脅嬰幼兒健康，尤其是早產兒、先天性心臟病患兒、免疫缺陷的嬰兒和兒童易發嚴重性RSV感染。從新生兒到成年人任何年齡組都會感染合胞病毒。嬰幼兒症狀較重，可有高熱、鼻炎、咽炎及喉炎，以後表現為細支氣管炎及肺炎。少數病兒可並發中耳炎、胸膜炎及心肌炎等。成人和年長兒童感染後，主要表現為上呼吸道感染。有研究表明RSV流行季節集中於每年的冬春季(11月至翌年3月，高峰出現在12月至翌年1月)，我國北京地、杭州、蘇州及其他溫帶國家(如日本、美國)均一致，就診的兒童患者陽性率可達42.50% 。
偏肺病毒(MPV) 偏肺病毒（familyParamyxoviridae）是有包膜的大約13kb單股負鏈RNA病毒。MPV是2001年Vanden Hoogen等首次報導的一類與人類, 特別是嬰幼兒呼吸道感染相關的新病毒。MPV與近10%病因不明的呼吸道感染有關, 是非流感病毒流行季節兒科急性呼吸道感染僅次於呼吸道合胞病毒的第二位病毒病原。MPV 感染的臨床表現與RSV 非常相似, 可引起上呼吸道感染以及嚴重的毛細支氣管炎、肺炎, 是引起嬰幼兒喘息主要原因之一，可誘導或加重哮喘急性發作。MPV 在全世界流行，可以感染兒童、老人、免疫缺陷者，尤其以兒童為主要感染對象。MPV感染具有明顯季節性，在大多數地區全年散發，好發於晚冬和春天，其流行高峰常與RSV活動高峰相同或稍後。研究報導，我國2007-2008年MPV感染主要發生冬春季，占全年MPV感染的84.4%。
副流感病毒1,2,3,4型(PIVl,2,3,4) 副流感病毒（familyParamyxoviridae）多形有包膜的病毒, 直徑約125～250 nm, 負單鏈RNA 基因組, 核衣殼蛋白緊密包饒。可通過人與人直接接觸或飛沫傳播, 進入人體於呼吸道上皮細胞中增殖。PIV可引起所有年齡組的人上呼吸道感染, 尤其是可引起嬰幼兒及兒童哮喘、細支氣管炎和肺炎, 更易於引起嚴重下呼吸道感染, 並可引起急中耳炎, 與急性和慢性神經系統疾病有關。PIV感染呈全球性分布, 是常見的社區獲得性呼吸道感染的病原, 2歲以下的兒童感染率最高, 成人感染較少。機體對PIV 不能產生有效、持久的免疫保護, 終生可感染此病毒。根據遺傳學和血清學可分為4型, PIV1～4,每種亞型主要的結構和生物學特徵相似，但流行病學和所引發疾病的臨床特徵有差異。PIV1一般為隔年發生一次較大的交替流行, 全球都可發病。美國已報導從1973 年以來每個奇數年的秋天發生PIV1 流行; 每次PIV1流行時, 約有0. 57 ~ 2. 89 萬兒童( < 5 歲) 住院。PIV2一般為每兩年一次或與PIV1交替流行, 在美國每年因PIV2 感染住院的兒童約0. 18~ 1. 56萬例, 其中約60% 發生於< 5 歲兒童, 高峰年齡為1~ 2 歲。英國報導PIV3感染占PIV總感染的71% , 主要流行於春夏季, 且常年均有散發, 北美、芬蘭和澳大利亞HPIV3 流行和英國相似。美國每年因PIV3感染住院兒童約0. 87~ 5. 2萬例, 尤其多見於合併有免疫抑制和慢性病患兒。PIV4分離和流行病學很少有報導, 且研究數據在各年齡組比較分散。臨床上分離出來的主要為PIV4b 亞型, 可引起不同呼吸道症狀, 但一般症狀較輕, 住院率較低。PIV 可引起所有的呼吸道感染性疾病, 在嬰幼兒嚴重下呼吸道感染的病原體中, 檢出率僅次於RSV。血清學調查亦顯示, 絕大多數6～10 歲兒童曾感染過PIV。
鼻病毒(HRV)鼻病毒（familyPicornaviridae）核心為無摺疊的單股正鏈RNA, 長約7200bp。HRV是致呼吸道感染病毒中重要的致病因子, 可引起急、慢性呼吸道感染, 嚴重時會引發哮喘、慢性阻塞性肺炎等臨床疾病。HRV 感染後常表現為感冒症狀, 大約有10% - 20%的成年人感冒是由HRV 感染引起, 而嬰幼兒感冒有15% 到30% 是由HRV 致病。HRV的感染具有自限性, 但是有時會引起諸如哮喘、充血性心衰, 支氣管擴張, 包囊纖維化等嚴重併發症, 並且HRV 多與其它呼吸道病毒合併感染, 例如呼吸道合胞病毒、腺病毒、副流感病毒、冠狀病毒以及腸道病毒等。值得一提的是對於兒童和患有呼吸道基礎疾病的易感群體, HRV 感染後還可能會出現較為嚴重的後遺症, 嚴重影響患者的生活質量。在世界範圍內HRV感染存在於各年齡組並全年均可發生，但在溫帶地區HRV感染流行高峰主要集中於早春及秋季，檢出率最高可達56.4%。
腸道病毒(HEV) 腸道病毒（familyPicornaviridae）含有一個單股正鏈RNA 病毒, 大小約7- 8kb。腸道病毒可引發多種感染, 情況較為複雜。主要包括急性呼吸道疾病、無菌性腦膜炎、腦膜腦炎、心肌炎、手足口病、新生兒多器官衰竭和急性弛緩性麻痹等。其發病多以綜合徵出現, 嬰幼兒患者可引發嚴重心肌炎或重症肺炎, 而導致死亡。HEV感染在夏秋季為主,多見於溫暖季節5~ 10月, 有研究檢出率可達26.4%，熱帶和亞熱帶可一年四季流行.
人博卡病毒(HBoV)人博卡病毒（familyParvoviridae）是線性單鏈DNA。HBoV是由瑞典學者Allander等於2005年從呼吸道感染患兒鼻咽分泌物中進行病原檢測, 分離得到的一種新病毒。HBoV 呈全球性分布, 世界各地相繼報導從嬰幼兒的鼻咽分泌物、血清及糞便和尿液中檢測到HBoV。HBoV感染者的普遍症狀是發熱、乾咳、呼吸難、輕微哮喘等, 部分出現呼吸困難, 伴有輕微哮喘症狀, 而機體其他指標如白細胞計數、氧飽和度、C反應蛋白水平等均未出現異常, 部分患者X 線胸片異常。急性呼吸道感染患者(主要是兒童)的呼吸道分泌物中, HBoV的陽性率為3. 1% ~17. 1%，HBoV四季均可檢測到, 有研究顯示冬季檢出率高。多數研究認為, HBoV感染的高峰季節為冬季, HBoV 的檢出率是5. 2%。
