基本介紹
- 中文名：上皮細胞
- 外文名：Epithelial Cell
- 所在位置：皮膚或腔道表層
- 形狀差異：扁平、柱狀
- 主要分布：鼻腔、鼻咽、器官、肺、胃、腸
- 主要作用：保護和吸收
分類,作用,培養,
分類
上皮組織分為被覆上皮、腺上皮和感覺上皮三類，而通常所說的上皮就是指被覆上皮。
腎上皮細胞管型
腎上皮細胞管型上皮細胞按細胞層數可分為單層和復層兩類，按形狀可分為柱狀和鱗狀。
作用
皮膚外層的上皮細胞普遍角質化，有保護和吸收的作用。
腔道中的上皮細胞多分化，有分泌，排瀉和吸收等功能。
消化器官和肺等器官表面的上皮細胞，對於消化吸收、交換氧等發揮著重要作用。
培養
1）表皮細胞培養
1．取材：取外科植皮或手術殘餘皮膚小塊，以角化層薄者為佳，早產流產兒皮膚更好，切成0.5～1平方厘米小塊。
2．EDTA處理：先置入0.02%EDTA中室溫置5分鐘。
3．冷消化：換入0.25%胰蛋白酶中，置4℃過夜。
4．分離：取出皮膚，用血管鉗或鑷子把表皮與真皮層分開。
5．溫消化：取出表皮單獨處理，用剪刀剪成更小的塊後，置入新的0.25%胰蛋白酶中，37℃再消化30～60分鐘。
6．用吸管輕輕反覆吹打，使成細胞懸液。
7．培養液：通過80目不鏽鋼紗網濾過後，低速離心，吸上清，直接加入Eagle液和20%小牛血清，製成細胞懸液，接種入碟皿中，CO2溫箱培養。
2）乳腺組織培養
直接培養法：（適於培養含纖維少的軟組織）
1．在含有少量培養液或Hanks液的容器中，用鋒利刀片將組織反覆切割成碎塊。
2．把組織碎塊連同液體注入離心管中，再補加少許培養液，用吸管吹打片刻，置試管架3～5分鐘。吸除上層液可排除非乳腺細胞部分。重複2～3次。
3．末次處理結束後，向沉降管中再補加培養液，用吸管稍吹打，使沉降物重懸。不待細胞團塊下降立即通過3～4層無菌紗布濾入另管中。
4．調整好適宜密度，接種入培養瓶中培養。
膠原酶消化法：（適於處理含纖維多的較硬組織）
其過程與培養其它組織相同。
3）胃上皮細胞培養
1．取材：取胃潰瘍或胃癌手術切除胃標本遠端非病變區黏膜少許。
2．清洗：用含慶大黴素（400微克/毫升）和二性黴素（2微克/毫升的Hanks）液漂洗後，用鈍器剝離下黏膜，剪成1mm3大小。
3．消化：在I型膠原酶和透明質酸酶中，於37℃中消化80分鐘。
4．離心：收集細胞懸液，800轉/分離心後，Hanks液漂洗兩次。
5．接種：末次離心後加入含有1%～2%胎牛血清的完全培養基，接種入不同孔數的培養板中，接種量依不同實驗目的而定。
4）肝細胞培養
初代組織塊培養：取新鮮肝臟，先剝除被膜和血管等纖維成分，用刀或剪刀把肝臟剪成1mm3左右的小塊，採用帖壁培養法。
5）內皮細胞培養
1．取產後的新鮮臍帶。如不立即培養可以保存於4℃中，但不宜超過12小時。無菌剪取長10～15厘米一段。其它如胚胎和幼體動物的大血管，亦可用於培養。
2．先用三通注射器吸溫PBS液注入臍帶的靜脈中，洗除殘血，注入口處宜用線繩結紮，以防液體返流。
3．用血管鉗夾緊臍帶一端，從另端向臍靜脈中徐徐注入最終濃度為0.1%的膠原酶，待末端出現液體後結紮之，令充滿血管，注入口亦應結紮，以防液體返流，消化3～10分鐘。
4．吸出含有內皮細胞的消化液，注入離心管中，為獲取更多細胞，可再注入溫PBS沖洗2～3次徹底清除乾淨殘餘細胞，一併注入離心管中離心。
5．吸除上清，加1640培養液，製成細胞懸液，接種入瓶皿中培養，順利時2～3天內細胞即可長成單層。
6）毛細血管內皮細胞培養
腫瘤條件培養基製備：
1．取C3H小鼠的S-180實體肉瘤組織。
2．胰蛋白酶消化，Dulbecco改良Eagle氏培養液15ml（含10%小牛血清），接種到T-75 Falcon產培養瓶中培養。
3．在細胞生長接近完全匯合時，收集培養液製成條件培養基；再用含10%小牛血清的新培養液後，也每隔兩天收集一次，可獲得多量條件培養。
4．4000轉/分離心後，再通過0.22μm微孔濾膜濾過，－20℃凍存備用（臨用前融解）。
