長鏈非編碼RNA對乳腺癌幹細胞分化的調控研究

《長鏈非編碼RNA對乳腺癌幹細胞分化的調控研究》是依託上海交通大學，由徐迎春擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：長鏈非編碼RNA對乳腺癌幹細胞分化的調控研究
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：徐迎春
• 依託單位：上海交通大學

項目摘要

乳腺癌幹細胞（BCSC）是乳腺癌發生、發展、復發和轉移的根源，長鏈非編碼RNA具有調控基因功能，其對BCSC分化的調控作用目前尚未見報導。本課題擬以MCF-7、MDA-MB-231和原代乳腺癌細胞來源的BCSC為研究對象，以長鏈非編碼RNA乳腺癌幹細胞基因調控網路為切入點；擬運用lncRNA晶片結合測序分析技術進行乳腺癌幹細胞與非幹細胞性癌細胞的lncRNA表達譜的差異性比對分析，通過生物信息技術進行可能作用靶點功能預測，並以GFP-慢病毒-SiRNA和lncRNA Mimics轉染BCSC敲除或過表說付體達lncRNA，探索其基因調控網路的內在關聯及其在BCSC維持自我更新、增殖、分化、致瘤性和腫瘤復發轉移的調控功能，並進一步臨床驗證其相關性，以期為探索乳腺癌幹細胞的靶姜市糊蒸向治療提供依據。

結題摘要

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，乳腺癌幹細胞（BCSC）是乳腺癌發生、發展、復發和轉移的根源，長鏈非編碼RNA具有調控基因功能，其對BCSC分化的調控作用目前尚未見報導。本課題以MCF-7、MDA-MB-231和原代乳腺癌細胞來源的BCSC為研究對象，以長鏈非編碼RNA乳腺癌幹細胞基因調控網路為切入點；通過微球體培養與細胞表面的標誌CD44+/CD24-流式分選幹細胞，原代乳腺癌細胞、MCF-7細胞能夠形成微球體，微球體及CD44+/CD24-細胞高表達幹細胞相關基因，對多種化療藥物耐藥，具有幹細胞特徵。運用Affymetrix Exon Array_Gminix lncRNA-WT v1.0晶片進行乳腺癌幹細胞與非幹細胞性癌細胞的LncRNA表達譜的差異性比對分析，獲得3倍及以上差異上調錶達LncRNA總計41個；獲得下調的LncRNA總計料榆25個，利用KEGG資料庫對該群探戶故基因進行信號通路分析發現，上調差異基因參與的顯著性信號轉導通路包括RNA轉運和真核細胞的核糖體合成等；下調差異基因參與的顯著性信號轉導通路包括腫瘤中的轉錄失調和青春晚期糖尿病發生。GO Analysis方法提示上調差異基因的訂敬舉顯著性功能分析結果包括有轉錄和轉率調節以及DNA依賴；下調差異基因的顯著性功能分析結果包括有RNA聚合酶II啟動子的轉錄調節等。結合差異mRNA和顯著性信號通路結果中的差異mRNA交集與差異lncRNA的共表達調控網路，篩選出LncRNA進一步分析驗證，證實BCSC中存在9個上調lncRNA（LINC00665, THAP9-AS1, NUTM2A-AS1, LINC01184, LINC01257, RAB11B-AS1, GLIDR, PVT1 和INHBA-AS1），和1個下調的lncRNA（CUEDC），qRT-PCR分析發現，在MCF-7微球體中，以上9個lncRNA表達上調和CUEDC下調；靶向CUEDC的SiRNA轉染MCF-7細胞使其功能缺失後，幹細胞因子sox2、nanog表達上調，克隆形成試驗提示克隆形成能力明顯增強，提示幹細胞特性增強，通過生物信息技術利用公共數據分析發現高表達LncRNA CORTP及RBL9的乳腺癌患者具有相對較好的預後，為乳腺癌幹細胞靶向凶乃蒸連治糠笑遙療策略提供依據。