《LncRNA-BCL1在乳腺癌發病中的作用及機制研究》是依託復旦大學，由周平擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：LncRNA-BCL1在乳腺癌發病中的作用及機制研究
- 依託單位：復旦大學
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：周平
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
長鏈非編碼RNA（LncRNA）與腫瘤發病關係密切，但乳腺癌相關的LncRNA研究甚少。前期我們在乳腺癌標本中經過晶片雜交篩選出了有顯著差異的LncRNA 500餘條並預測靶mRNA，選擇LncRNA-NR002734(本課題組首次發現,自命名為BCL1)及其預測靶基因PTTG1進行了研究，現已初步驗證。下一步①大樣本乳腺癌標本檢測BCL1表達、分析其與臨床惡性度的相關性。②乳腺癌細胞實驗：干擾BCL1表達觀察對細胞生物學行為的影響並研究BCL1與PTTG1的調控機制。以期初步闡明BCL1在乳腺癌發病中的作用。
結題摘要
乳腺癌嚴重危害到女性的健康和生命，早期診斷和防治轉移是降低乳腺癌致死率的關鍵因素。近年來，對功能性非編碼RNA的研究焦點由microRNA轉移到了lncRNA。越來越多的研究表明lncRNA在腫瘤的形成和轉移過程中具有重要的功能。但lncRNA在乳腺癌中的作用研究尚不多見且機制遠未闡明。因此我們將lncRNA引入乳腺癌的研究。 本研究包括三部分： 第一部分：利用lncRNA表達譜晶片篩選乳腺癌特異表達的lncRNAs；採用生物信息學方法分析他們之間的相關性、構建共表達網路圖；並在乳腺癌組織及乳腺癌細胞中進行驗證。晶片結果：乳腺癌組織中有500餘條lncRNAs表達異常。挑選5條表達升高的lncRNAs，在100例臨床乳腺癌組織、配對癌旁組織及乳腺癌細胞系MCF-7、T47D、MDA-MB-231進行驗證，結果顯示：5條lncRNAs在乳腺癌組織的表達高於對應的癌旁組織；在乳腺癌細胞系MCF-7、T47D、MDA-MB-231中的表達高於乳腺正常上皮細胞MCF-10A，與晶片結果相符合。 第二部分：在挑選的5條lncRNAs中，選定NR_028414（BCL1）作為研究目標。運用螢光原位雜交技術（FISH）並與細胞核DAPI 染色相結合，發現BCL1 定位在細胞胞質和細胞核內。下調BCL1在MDA-MB-231細胞中的表達，使用CCK-8、流式細胞儀檢測BCL1對細胞活性、周期和凋亡的影響。結果顯示：下調BCL1後細胞活性降低，早期凋亡數目明顯增加，但細胞的生長周期無明顯變化。進一步利用western blot檢測凋亡相關蛋白Bid、Bax、Caspase3和ASK的變化。Western blot結果顯示：下調BCL1後，促凋亡蛋白Bid、Bax、Cleaved caspase3表達增加，ASK無顯著變化。 第三部分：進一步開展RIP和RNA Pull Down實驗，以探討BCL1是否通過與蛋白質結合而發揮作用。初步結果顯示：BCL1與EZH2蛋白質相結合，但還需進一步驗證。 結論：①本課題組首次發現的長鏈非編碼RNA BCL1在乳腺癌中表達明顯上調；②BCL1的作用與其促進細胞增殖、抑制Bid、Bax、Cleaved caspase3表達來抑制細胞凋亡有關；③BCL1可能與EZH2蛋白相結合。提示BCL1促進乳腺癌發生髮展的機制可能與其結合蛋白有關。
