長鏈非編碼RNA AK124454在三陰性乳腺癌發生髮展中的機制研究

《長鏈非編碼RNA AK124454在三陰性乳腺癌發生髮展中的機制研究》是依託復旦大學，由邵志敏擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：長鏈非編碼RNA AK124454在三陰性乳腺癌發生髮展中的機制研究
• 依託單位：復旦大學
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：邵志敏

項目摘要

三陰性乳腺癌是乳腺癌中預後較差的分子亞型，其復發和轉移的具體調控機制目前尚不明確。長鏈非編碼RNA（lncRNA）目前在腫瘤的發生髮展過程中扮演著重要角色，但調控乳腺癌尤其是三陰性乳腺癌的長鏈非編碼RNA鮮有報導。本課題組前期通過表達譜晶片，篩選出三陰性乳腺癌組織中高表達的lncRNA，並建立包含3個mRNA和2個lncRNA的預後模型，挑選出其中未被報導的lncRNA：AK124454，擬以“AK124454-相互作用蛋白（共表達基因）-腫瘤發生髮展”為線索，深入研究AK124454及其相互作用蛋白在三陰性乳腺癌發生髮展中的分子機制，尋找相關治療靶點，為尋找三陰性乳腺癌的調控發生髮展機制以及靶向治療的可行性提供理論基礎。。

結題摘要

三陰性乳腺癌（TNBC）是一類預後較差，異質性強、缺乏治療靶點的腫瘤。既往研究表明,長鏈非編碼RNA（lncRNA）在TNBC進展過程中起重要作用，其作為重要的一類轉錄產物正在收到關注。本研究重點對TNBC中具有預後預測意義的lncRNA進行篩選、生物學機制研究以及治療靶點的探索。通過全轉錄組HTA2.0晶片，篩選出TNBC中高表達，並提示較差預後的lncRNA，而後通過RNA測序（RNA-Seq），定量PCR（qPCR）、免疫組化、cDNA末端快速擴增法（RACE）、RNA原位雜交、載體克隆、細胞轉染、病毒包裝、體外小室遷移侵襲實驗、體外增殖實驗、體內裸鼠脂肪墊成瘤實驗、裸鼠肺移植瘤實驗、RNA pull down、免疫印記、免疫沉澱、染色質免疫共沉澱等實驗研究該lncRNA功能。並通過Kaplan-Meier生存分析、t檢驗、相關性分析等進行統計分析。通過轉錄組晶片，我們篩選出一系列在TNBC中高表達、且與患者較差預後密切相關的lncRNA：AK124454。我們鑑定該lncRNA全長序列與內源性逆轉錄病毒（HERV）序列中的長末端重複序列（LTR）70高度同源，我們命名為TROJAN。為進一步分析TNBC中的HERV表達情況，我們採用RNA-Seq在TNBC配對癌與癌旁組織中進行分析，通過篩選，我們發現該HERV在TNBC組織中高表達，並提示患者較差預後。通過體外及體內功能實驗，發現TROJAN可促進TNBC增殖、轉移。採用反義寡核苷酸鏈(ASO)干擾TROJAN可抑制小鼠肺轉移。在機制方面，TROJAN可以與抑癌基因ZMYND8相互作用，並通過促進後者泛素化修飾使其降解。我們進一步發現TROJAN與ZMYND8共同作用於癌基因EGFR、VEGFA以及MDM2的啟動子區域，論證了TROJAN降解ZMYND8，而ZMYND8轉錄抑制EGFR、VEGFA以及MDM2這條通路，並在臨床樣本中得到證實。我們篩選出在TNBC高表達的、與患者較差預後密切相關LncRNA：TROJAN，可以促進TNBC增殖、轉移。TROJAN通過促進泛素化修飾降解ZMYND8，從而使EGFR、VEGFA以及MDM2靶基因表達升高，促進TNBC進展。採用特異靶向TROJAN的藥物ASO治療可有效抑制TNBC進展。