《腎小球系膜細胞異常表達IgA1參與IgA腎病發病機制》是依託北京大學，由王悅擔任負責人的重大研究計畫。
基本介紹
- 中文名：腎小球系膜細胞異常表達IgA1參與IgA腎病發病機制
- 項目負責人：王悅
- 依託單位：北京大學
- 項目類別：重大研究計畫
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
普遍認為IgA腎病（IgAN）患者腎小球系膜區沉積的IgA1來自循環免疫複合物。近來研究證實正常組織細胞也表達IgA。我們前期實驗發現人腎小球系膜細胞（MC）表達IgA1，參與MC增殖和分泌，金葡菌SAC誘導 MC IgA1異常表達，提示MC可能通過異常表達IgA1參與IgAN發病機制。本項目將①體外培養人原代MC，研究其IgA1表達及表型特點、IgA1異常表達及其誘因和機制，根據MC IgA1特徵性基因重排設計製備特異性探針和抗體；② 收集IgAN患者腎組織標本，利用特異性探針和抗體開展組織原位雜交和免疫共定位，提純腎組織IgA1進行糖基化分析和比較，闡述患者腎組織MC異常表達IgA1；③ 製備B細胞缺陷小鼠IgAN模型，除外循環IgA1影響的前提下，動態檢測腎組織IgA1水平，分析其與腎臟病理改變和臨床表現的相關性。研究結果將有助於豐富IgAN的發病機制，為臨床診療提供新線索。
結題摘要
本項目依據非B細胞可以產生免疫球蛋白的基礎研究報導和IgA腎病的病理生理特點對腎小球系膜細胞能否通過產生IgA1參與IgA腎病發病進行研究。首先，我們開展體外培養人系膜細胞（HMC）系和原代人HMC IgA基因轉錄和蛋白表達的研究，結果顯示：① HMC存在Igα、Igk、Igλ的基因轉錄和蛋白表達，且隨細胞周期呈現動態變化；HMC產生的IgA參與細胞的生存和黏附；致病因子SAC可以上調HMC IgA的表達並且改變其可變區重排；②HMC 正常培養條件下可產生半乳糖缺失的IgA（Gd-IgA1）；致病因子SAC、SEB、LPS誘導HMC分泌Gd-IgA1並在細胞外呈顆粒樣沉積；HMC表達的TLRs 介導了SAC誘導HMC分泌Gd-IgA，TLRs抑制劑可以阻斷致病因子誘導Gd-IgA1/IgA表達的作用。這些結果提示，生理狀態下，系膜細胞可以產生少量的IgA和Gd-IgA1，維持細胞的生存和黏附能力；在致病因子刺激時，系膜細胞產生並分泌大量Gd-IgA1，沉積在細胞外，可能參與IgA腎病的發病。其次，①我們在野生型小鼠以及B細胞缺陷的μMT小鼠腎小球系膜區檢測到IgA 沉積，結果顯示μMT小鼠沉積的IgA超過野生型小鼠。②我們在健康對照、微小病變腎病患者和IgAN患者腎組織中均檢測到IgA的沉積，不同之處在於健康對照和微小病變患者腎小球存在細小、散在IgA表達，IgAN患者呈現IgA粗大、瀰漫表達。③我們從健康對照和IgAN患者腎小球中分離單細胞，在單細胞水平檢測到HMC存在IgA基因轉錄和重排。再次，我們檢測了健康對照和IgAN患者、以及疾病對照組特發性膜性腎病（IMN）患者外周血IgA、Gd-IgA1和IgG各亞型的濃度，結果發現IgAN患者血液IgG4的水平顯著低於健康對照和IMN，對輔助診斷IgAN及鑑別診斷IMN具有較好的靈敏度和特異性。最後，我們構建了IgA條件性敲除的小鼠（IgAfl/fl），並與FOXD1-Cre小鼠進行交配，得到了系膜細胞特異性條件性敲除IgA的小鼠FOXD1-Cre＋IgAfl/fl，為後續研究系膜細胞來源的IgA在IgAN發生髮展中的作用奠定了基礎。總之，本項目首次將非B細胞表達Ig創新性基礎研究與我國重大腎小球疾病結合起來，首次提出並闡明系膜細胞異常表達和分泌IgA1可能參與IgA腎病的發病，創新或者完善了IgAN的發病
