《肺纖維化發生的新機制研究- - - - NMDA受體的作用》是依託中南大學，由羅自強擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：肺纖維化發生的新機制研究- - - - NMDA受體的作用
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：羅自強
- 依託單位：中南大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
肺纖維化是嚴重危害健康的呼吸系統常見併發症，但發生機制遠未闡明。申請者基於博萊黴素肺纖維化的發生時肺內有谷氨酸的大量釋放及激活谷氨酸的NMDA受體在體外可促進肺成纖維細胞增殖和膠原合成的前期結果，首次提出肺內谷氨酸的過量釋放及NMDA受體的激活可能是促進肺纖維化發生的重要因素。為此，本申請計畫在整體水平觀察NMDA受體阻斷劑美金剛胺對博萊黴素肺纖維化程度的影響，並採用骨髓GFP嵌合小鼠等多種技術探討NMDA受體促肺內成纖維細胞增生的細胞來源；還利用轉錄因子活性譜晶片、EMSA、報告基因、ChIP、siRNA等多種轉錄調控研究策略在體外探討NMDA受體促肺上皮細胞EMT發生及促EMT關鍵調控基因Snail1表達的轉錄調控機制和胞內信號途徑，揭示NMDA受體激活在肺纖維化發生中的作用及細胞分子機制，確認NMDA受體的激活是促進肺纖維化發生的新的重要因素，為肺纖維化防治的研究提供新的靶點。
結題摘要
肺纖維化是嚴重危害健康的呼吸系統常見併發症，但發生機制遠未闡明，至今仍無特效的治療方法。申請者基於自己有關博萊黴素肺纖維化的發生時肺內有谷氨酸的大量釋放及激活谷氨酸的NMDA受體在體外可促進肺成纖維細胞增殖和膠原合成的前期結果，首次提出肺內谷氨酸的過量釋放及NMDA受體的激活可能是促進肺纖維化發生的重要因素。為此，開展三個方面的研究： 1.本項目在整體水平證實，在博來黴素建模同時預防性給予NMDA受體阻斷劑美金剛胺可減輕早期肺內炎症反應和後期肺纖維化程度；在建模14天時給予美金剛胺治療性干預也可有效減輕後期小鼠博萊黴素肺纖維化程度，但其保護作用略低於預防性用藥，表明NMDA受體激活參與博來黴素所致早期肺內炎症反應和後期肺纖維化的發生髮展過程。 2.本項目在細胞水平證實，肺成纖維細胞和上皮細胞均有NMDA受體表達；NMDA受體激活可促進成纖維細胞增殖、膠原表達和向肌成纖維細胞轉變，內源性谷氨酸通過NMDA受體參與介導TGFβ促成纖維細胞增殖；NMDA受體激活可促進肺泡上皮細胞EMT的發生；阻斷NMDA受體可降低肺纖維化模型小鼠肺組織和骨髓細胞中fibrocyte含量，減少肺內成纖維細胞的來源。 3.本項目在轉錄調控水平證實， NMDA受體激活可與低劑量TGF-β1協同促進在EMT發生中發揮重要作用的Snail1基因的表達；通過成功構建不同長度重組報告基因質粒，分別證明Snail1基因啟動子對TGF-β1應答區域和對NMDA應答區域分別位於不同區域。進一步採用EMSA技術證明，-869～-815bp可能是對NMDA刺激應答的關鍵啟動子區域結合之一。 上述研究表明，NMDA受體激活在促進肺纖維化發生髮展中的起有重要作用。NMDA受體激活促進肺纖維化發生髮展的細胞機制與促進纖維細胞的活化和肺上皮細胞的EMT發生，促進肺內趨化因子的表達和肺內fibrocyte的募集有關。NMDA受體激活促進肺上皮細胞EMT的發生有賴於ERK介導促進Snail基因的表達增強。因此，NMDA受體的激活是促進肺纖維化發生的新的重要因素，為肺纖維化防治的研究提供新的靶點
