TRPCs介導PMVECs表型轉變在肺纖維化中的作用及機制研究

《TRPCs介導PMVECs表型轉變在肺纖維化中的作用及機制研究》是依託中國人民解放軍第四軍醫大學，由顏林楓擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：TRPCs介導PMVECs表型轉變在肺纖維化中的作用及機制研究
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：顏林楓
• 依託單位：中國人民解放軍第四軍醫大學

項目摘要

肌成纖維細胞（MFb）過度分泌細胞外基質是特發性肺纖維化的病理基礎，而轉化生長因子β1（TGF-β1）和結締組織生長因子（CTGF）是促進MFb形成的關鍵細胞因子。我們研究發現，博萊黴素（BLM）誘導的肺纖維化大鼠肺微血管內皮細胞（PMVECs）持續高表達TGF-β1和CTGF，細胞呈增殖表型且[Ca2+]i過載，但原因不明。瞬時受體電位通道C型（TRPCs）是內皮細胞表面重要的鈣離子通道，其介導的 [Ca2+]i增加參與調節內皮細胞增殖和分化，但肺纖維化時PMVECs表型改變是否與TRPCs活性調節有關及其作用機制尚不清楚。本課題擬以TRPCs介導的鈣代謝異常為切入點，採用免疫組化、蛋白印跡、雷射共聚焦及藥物干預等方法，從細胞及活體研究BLM作用後PMVECs表型轉變與TRPCs的相關性，探討PMVECs表型轉變在肺纖維化中的作用及其機制，為確定肺纖維化早期干預的靶點提供實驗和理論基礎。

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結題摘要

肌成纖維細胞（MFb）過度分泌細胞外基質是特發性肺纖維化的病理基礎，而轉化生長因子β1（TGF-β1）和結締組織生長因子（CTGF）是促進MFb形成的關鍵細胞因子。我們前期研究發現，博萊黴素（BLM）誘導的肺纖維化大鼠微血管內皮細胞（PMVECs）持續高表達TGF-β1和CTGF，細胞呈增殖表型且[Ca2+]i過載，但原因不明。瞬時受體電位通道C型（TRPCs）是內皮細胞表面重要的鈣離子通道，但肺纖維化時PMVECs異常是否與TRPCs異常調節有關尚不清楚。本課題①通過免疫螢光雙標對BLM肺纖維化大鼠在體肺泡組織和體外培養PMVECs的表型進行鑑定，BLM作用後大鼠PMVECs和PAECs兩種細胞中的α-SMA均顯著升高，隨著BLM作用時間延長， PMVECs的a-SMA表達持續增高。由此可見，BLM作用後PMVECs和PAECs均可轉分化為間充質細胞，而PMVECs轉分化可能是肺纖維化發生髮展的關鍵。②BLM體外刺激肺泡組成細胞，證實PMVECs表型轉變並異常分泌CTGF、TGF-β1是肺纖維化的關鍵細胞基礎，且在BLM大鼠PMVECs中TRPC3/6/7表達異常，說明TRPCs可能是導致PMVECs表型改變的原因。③BLM體外刺激肺泡組織細胞後，雷射共聚焦顯示PMVECs細胞內鈣離子超載最顯著，加入TRPCs阻滯劑後，PMVECs的胞內[Ca2+]i下調，說明TRPC複合體功能異常是導致肺纖維化大鼠PMVECs [Ca2+]i超載的根本原因。綜上研究提示，PMVECs轉分化為間充質細胞是BLM大鼠肺纖維化的細胞學基礎，TRPC3/6/7是導致PMVECs鈣離子超載的主要原因。因此，探討PMVECs表型轉變在肺纖維化中的作用及其機制，為確定肺纖維化早期干預的靶點提供實驗和理論基礎。