《p66shc調控特發性肺纖維化形成的表觀遺傳機制研究》是依託中南大學，由張湘瑜擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：p66shc調控特發性肺纖維化形成的表觀遺傳機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：張湘瑜
- 依託單位：中南大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
特發性肺纖維化（IPF）與氧化應激密切相關。P66shc在促進線粒體氧化應激產生中起關鍵作用，其在IPF中的作用尚無研究。我們前期工作表明IPF患者p66shc表達增高，TGF-β1和表觀遺傳修飾可調節p66shc的表達。TGF-β1/Smad p53參與纖維化病變的形成,p66shc為p53下游效應基因。推測TGF-β1/Smad p53可能通過對p66shc的表觀遺傳修飾，參與肺纖維化的發病機制。本課題擬利用活檢標本、體外培養肺成纖維細胞和動物模型，進一步了解p66shc在IPF中的表達，及TGF-β1/Smad p53信號通路，是否轉錄調控p66shc DNA啟動子區域的去甲基化和組蛋白乙醯化修飾，上調p66shc的表達，產生氧化應激，促進成纖維細胞的分化和肺纖維化的形成，從而揭示p66shc在IPF形成中的作用和機制。為IPF防治開闢新途徑。
結題摘要
特發性肺纖維化(IPF)是一種嚴重肺間質病變, 致殘率、病死率高。 確切的發病機制尚未完全闡明，目前無確切有效的治療方法。已有實驗證實凋亡抵抗和組蛋白乙醯化調節在肺纖維化的形成中起重要的作用。組蛋白乙醯化酶抑制劑可促進細胞凋亡，p66shc介導細胞凋亡，組蛋白乙醯化修飾可調節p66shc的表達。因此本實驗的主要目的為研究p66shc在肺纖維化形成中的作用和機制以及組蛋白乙醯化對其作用的影響。我們的實驗證實，在TGF-beta1 誘導的成纖維細胞分化中，TGF-beta1濃度依賴性地降低p66shc的表達，增加a-SMA、磷酸化Smad2/3的表達；siRNA沉默p66shc後，a-SMA、磷酸化Smad2/3的表達降低，提示p66shc參與成纖維細胞的分化。組蛋白乙醯化酶抑制劑SAHA、TSA劑量依賴性地增加TGF-beta 誘導下的p66shc的表達，降低a-SMA、磷酸化Smad2/3的表達，增加凋亡指標Cleaved-Caspase 3的表達，增加組蛋白 H3AC、H3K4Me3、H4K5AC、H4K8AC、H3K18AC的表達；沉默p66shc可進一步增加SAHA、TSA的上述作用，增加Cleaved-Caspase 3的表達。用流式細胞計數儀測定細胞凋亡，可見SAHA明顯增加細胞凋亡，沉默p66shc後細胞凋亡進一步增加。已成功建立博來黴素肺纖維化動物模型，並用SAHA干預，H&E染色證實博來黴素明顯增加肺纖維化，SAHA降低博來黴素誘導的肺纖維化。免疫組化證實博來黴素增加肺組織a-SMA的表達，SAHA降低博來黴素導致的a-SMA的表達，p66shc的結果待染色。本實驗結果提示，p66shc在肺成纖維細胞的分化中起重要作用，p66shc通過調節細胞凋亡介導組蛋白乙醯化酶抑制劑對成纖維細胞分化的抑制。此實驗的研究結果可為IPF的防治提供新的靶點。 我們同時研究Sirtuin2在肺纖維化形成中的作用，目前實驗數據證實TGF-β1促進人胚肺成纖維細胞SIRT2表達，抑制SIRT2表達降低TGF-β1誘導的人胚肺成纖維細胞分化，SIRT2可能通過SIRT2/AKT/mTOR信號通路調節TGF-β1誘導的肺成纖維細胞的分化，參與肺纖維化的形成。
