紅色毛癬菌

定義

紅色毛癬菌是毛癬菌屬。紅色毛癬菌是引致東南亞地區及澳洲北部的原住民體癬的真菌，且隨著越戰的發展，由返回國家的軍人及難民被帶至世界各地。現時世界各地大部份皮癬的病源多是由紅色毛癬菌引致的。局部性的皮癬，可用止癢殺菌的藥物塗擦患處。

分類

域：真核域(Eukaryota)

界：真菌界(Fungi)

門：子囊菌門(Ascomycota)

亞門：盤菌亞門(Pezizomycotina)

綱： (Eurotiomycetes)

科：裸囊菌科(Arthrodermataceae)

屬：毛癬菌屬‎(Trichophyton)

種：紅色毛癬菌(T. rubrum)

學名：Trichophyton rubrum

傳統鑑別主要依據生理生化等方法，但紅色毛癬菌的菌落產紅現象受培養基類型、pH、培養溫度等因素的影響[1]，我們套用PCR方法，以微小衛星DNA 引物，對這2種癬菌的基因組DNA進行擴增，可以在很短時間內把它們區分開來。

材料與方法

[1] 實驗菌株：本研究採用紅色毛癬菌臨床分離株23株。紅色毛癬菌中11株來自上海地區，3株來自徐州地區，8株來自重慶地區，1株來自廣州地區，表型中羊毛型、絨毛型16株，粉末、溝紋型6株，顆粒型1株；所有菌株均經上海長征醫院真菌室作形態學及馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基、尿素瓊脂培養基鑑定。

[2] 主要試劑：DNA抽提緩衝液按文獻配製[2]，氯化苄為上海試劑三廠產品，TaqDNA聚合酶、PCR反應緩衝液、dNTPs為日本Takara公司產品。

[3] DNA製備：實驗菌株於馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基(PDA)平皿上28℃培養2周，無菌牙籤刮取菌絲體，採用氯化苄法提取基因組DNA[2]。

[4] PCR擴增：以寡核苷酸重複序列(GACA)4、(GTG)5及M13中心序列(5′－GAGGGTGGCGGTTCT－3′)等3種引物，對抽提的基因組DNA進行擴增。PCR反應體積20μL,其中包括：2μL10×PCR反應緩衝液(其中含Mg?2mmol/L)，1μLdNTPs(2.5mmol/L),2μL引物(10μmol/L),1μLDNA模板(50ng/μL)，1UrTaqDNA聚合酶(5U/μL)。反應條件：①(GACA)4：起始變性94℃5min；94℃1min，退火47℃1min，延伸72℃1min，38個循環；72℃延伸5min。②M13中心序列及(GTG)5：起始變性94℃5min；94℃1min，退火50℃1min，延伸72℃80s，35個循環；72℃延伸6min。產物於1.2%瓊脂糖凝膠電泳3V/cm，1.5h，紫外燈下照相記錄。

結果

在電泳凝膠上，可觀察到3種引物擴增下紅色毛癬菌呈現不同的帶型。在(GACA)4作引物時，紅色毛癬菌的主要擴增條帶有3條，大小約1100bp、950bp、600bp左右，特徵主條帶為950bp、1050bp2條。特徵條帶的差距相當明顯、直觀。

紅色毛癬菌

基本介紹

定義

分類

材料與方法

結果

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