序列測定用引物: DNA 序列測定是分子生物學中最重要和最精細的研究技術,其中最常使用的是末端終止法,即是一種依賴於特異DNA 引物的序列測定方法。
基本介紹
- 中文名:序列測定用引物
- 所屬學科:基因工程
序列測定用引物: DNA 序列測定是分子生物學中最重要和最精細的研究技術,其中最常使用的是末端終止法,即是一種依賴於特異DNA 引物的序列測定方法。
序列測定用引物: DNA 序列測定是分子生物學中最重要和最精細的研究技術,其中最常使用的是末端終止法,即是一種依賴於特異DNA 引物的序列測定方法。該法對模板的需要量較大,這就要求待測DNA 片段尤其是拷貝數少的片段首先...
序列特異性引物分析即根據各等位基因的核苷酸序列,設計出一套針對每一等位基因特異性的或組特異性的引物,此即為序列特異性引物(SSP)。SSP只能與某一等位基因特異性片段的鹼基序列互補性結合,通過PCR特異性地擴增該基因片段,從而達到分析基因多態性的目的。由於PCR技術的套用,使得DNA 測序技術從過去的分子克隆後測序...
引物步查 引物步查是2007年公布的遺傳學名詞。定義 一種DNA連續測序法。將待測DNA片段克隆進測序載體,進行測序電泳。當完成第一輪測定時,將引物與剛完成測序的DNA序列末端結合,進行第二輪測序電泳,如此重複直至完成。出處 《遺傳學名詞》。
雙脫氧鏈終止法MB序列分析技術大體分析步驟是:①將DNA克隆到MB的雙鏈複製型;②用帶扦入片段的載體轉化細胞並分離含插入片段的單鏈MBDNA;③以單鏈型DNA作模扳,利用DNA多聚酶大片段作引物延伸反應;④用序列分析凝膠分離不同長度的片段,依據凝膠放射自顯影像上條帶的位置可讀出此段DNA的核苷酸序列。
該技術的檢測反應有賴於AMV逆轉錄酶、噬菌體T7RNA多聚酶、核糖核酸酶H、兩種特別設計的特異性寡核苷酸引物和分子信標探針共同協作而完成。NASBA全稱是nucleic acid sequence-based amplification,即依賴核酸序列的擴增技術。 依賴核酸序列的擴增技術,是一種擴增RNA的新技術,是由一對引物介導的、連續均一的、體外特異...
一、引物設計及帶型分析 利用實例1獲得的QTL qHI-1所在區域玉米自交系B73的序列,利用Primer Premier 5.0軟體設計得到輔助篩選單倍體誘導性狀的引物,命名為X18,是由SEQ ID NO:1與SEQ ID NO:2組成的一對引物,引物序列如下:SEQ ID NO:1:CGGTGAAGGCATCAGAAGGG;SEQ ID NO:2:GGGAGGACGGCAAGCAAGAG。...
1.引物合成的純度高。2.合成的序列長。3.合成的效果好。合成過程 第一步是將預先連線在固相載體上的活性基團被保護的核苷酸與三氯乙酸反應,脫去其5′-羥基的保護基團DMT,獲得游離的5′-羥基。第二步,合成DNA的原料,亞磷醯胺保護核苷酸單體,與活化劑四氮唑混合,得到核苷亞磷酸活化中間體,它的3′端被活化,...
該發明的第二個目的是提供一組特異性強、靈敏度高的用於檢測H5亞型禽流感病毒的核苷酸序列。該發明的第三個目的是提供一種操作簡單、結果準確的用與檢測禽流感病毒的試劑盒。該發明的第四個目的是提供一種快捷、準確、方便的檢測禽流感病毒的方法。技術方案 禽流感病毒通用引物、探針序列:上游引物:CGTCAGGCCCCCTC...
檢測後發現其最低檢測出限分別為40pg和4pg。將該重組質粒作出3個亞克隆後,用自動測序儀按雙脫氧鏈終止法測出雙鏈的序列。用2對引物采和PCR-的方法,克隆出了從PvuII到DraI切點的VP2基因,2個亞克隆也採用相同的方法進行序列測定和分析。並為以後的基因工程疫苗研製奠定了基礎。
就是利用一種DNA聚合酶來延伸結合在待定序列模板上的引物。直到摻入一種鏈終止核苷酸為止。每一次序列測定由一套四個單獨的反應構成,每個反應含有所有四種脫氧核苷酸三磷酸(dNTP),並混入限量的一種不同的雙脫氧核苷三磷酸(ddNTP)。由於ddNTP缺乏延伸所需要的3-OH基團,使延長的寡聚核苷酸選擇性地在G、A、T或C處...
Sanger 法測序的原理就是利用一種DNA聚合酶來延伸結合在待定序列模板上的引物。直到摻入一種鏈終止核苷酸為止。每一次序列測定由一套四個單獨的反應構成,每個反應含有所有四種脫氧核苷酸三磷酸(dNTP),並混入限量的一種不同的雙脫氧核苷三磷酸(ddNTP)。由於ddNTP缺乏延伸所需要的3-OH基團,使延長的寡聚核苷酸選擇性...
利用一種DNA聚合酶來延伸結合在待定序列模板上的引物。直到摻入一種鏈終止核苷酸為止。每一次序列測定由一套四個單獨的反應構成,每個反應含有所有四種脫氧核苷酸三磷酸(dNTP),並混入限量的一種不同的雙脫氧核苷三磷酸(ddNTP)。由於ddNTP缺乏延伸所需要的3-OH基團,使延長的寡聚核苷酸選擇性地在G、A、T或C處終止...
不對稱PCR是利用 不等量的一對引物來產生大量單鏈DNA (ssDNA)的方法。不對稱PCR製備的單鏈 DNA在用於序列測定時不必在測序之前除 去剩餘引物,簡化操作、節約人力物力。另 外,用cDNA經不對稱PCR進行序列分析 或SSCP分析也是研究真核外顯子的常用方法。根據實驗設計的不同,不對稱 PCR又可分為引物濃度不對稱PCR...
引物 酶促測序反應中利用一個與模板鏈特定序列互補的合成寡核苷酸作為DNA合成的引物。在許多情況下,可將靶DNA片段克隆於M13噬菌體或噬菌粒載體,以取得單鏈DNA分子作為模板。但也可以採用Sanger法商定變性雙鏈DNA模板的序列。在以上兩種情況下,都可以採用能與位於靶DNA側翼的載體序列相退火的通用引物,而不必取得與...
錨定PCR主要用於分析具有可變末端的DNA序列,Loh等用A-PCR對人外周血淋巴細胞T細胞受體α-鏈的mRNA的多變性進行了分析。先合成cDNA,並用末端脫氧核苷酸轉移酶在其3’-可變區末端加上一個PolyG尾巴。Loh等恆定區與可變區連線部位設一個引物,另一個引物是一個具5’-polyG尾巴的引物。帶有PolyG尾巴的引物是一個...
該技術將固化引物的微球與單鏈DNA 相結合,構建DNA 模板文庫,利用微乳滴PCR 來生成擴增產物。經過多輪循環,每個微球表面都結合了大量相同的DNA 片段。富集微球並轉移到帶有規則微孔陣列的微孔板上,每個微孔只能容納1 個微球。微孔板的其中一面可以進行測序反應,另一面則與CCD 光學檢測系統相接觸。序列測定同樣採用...
單側指單引物重複擴增製備單鏈模板以用於雙脫氧序列測定 的技術。利用不對稱的引物比例並不能總得 到可重複的高產量單鏈DNA產物。作為一 種改進方法,單側PCR首先用對稱擴增產 生雙鏈模板,然後用其中一條引物重複擴增 產生足夠多的單鏈模板用於雙脫氧序列測 定。(侯一平)代謝活化是有的外源性化學物經過代謝其...
4.dna測序模板 可以是pcr產物、單鏈dna和質粒dna等。模板濃度應調整在pcr反應時取量1μl為宜。本實驗測定的質粒dna,濃度為0.2g/l,即200ng/μl。5.引物 需根據所要測定的dna片段設計正向或反向引物,配製成3.2μmol/l,即3.2pmol/μl。如重組質粒中含通用引物序列也可用通用引物,如m13(-21)引物,t...
根據已知的β-胡蘿蔔素酮化酶(β-caroteneketolase,BKT)的cDNA序列設計引物,利用長距離PCR擴增獲得了bkt基因的。DNA完整編碼片段及基因組DNA片段,並對這些片斷進行了序列測定。CDNA和基因組DNA比對結果表明該基因至少包括5個內含子,它們的剪下位點皆符合GU-AG規律。在比對結果中同時還發現一個19bp的短序列重複,該...
通過檢測螢光信號釋放的有無和強度,就可以達到實時測定DNA序列的目的。此技術不需要螢光標記的引物或核酸探針,也不需要進行電泳;具有分析結果快速、準確、高靈敏度和高自動化的特點。測序流程 1. 樣品種類:GS FLX系統支持各種不同來源的樣品序列測定,包括基因組DNA,PCR產物,BACs,cDNA及小分子RNA等,不同類型的...
――確認引物序列不是迴文結構。這可能是引物多聚體造成的結果。使用不同的引物。帶譜不可重複 ――DNA過多或過少。把基因組DNA濃度控制在10~100ng範圍之內,DNA量太少時,“真正”靶序列與引物的結合效率低,因此引物擴增會產生假的條帶,這就稱為引物偽跡;DNA量太多會導致錯誤配對(指引物與基因組DNA的配...
在同一反應管中,待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增(其中一個引物為螢光標記)。擴增後用內切酶消化PCR產物,競爭性模板的產物被酶解為兩個片段,而待測模板不被酶切,可通過電泳或高效液相將兩種產物分開,分別測定螢光強度,根據已知模板推測未知模板的起始拷貝數。3)PCR-ELISA法:利用地高辛或生物素等標記...
合成的引物必須經聚丙烯醯胺凝膠電泳或反向高壓液相層析(HPLC)純化。因為合成的引物中會有相當數量的“錯誤序列”,其中包括不完整的序列和脫嘌呤產物以及可檢測到的鹼基修飾的完整鏈和高分子量產物。這些序列可導致非特異擴增和信號強度的降低。因此,PCR所用引物質量要高,且需純化。凍乾引物於-20℃至少保存12-24個...
此cDNA的合成是採用Oligo(dT)12 MN為引物,其中M為A,C,G中的任意一種,N為A,C,G或T中的任意一種,所以共有12種oligo(dT)12 MN引物,其中M稱為錨定鹼基,起增大引物Tm值的作用,N稱為分類鹼基,對反轉錄進行分類。用這12種引物分別對同一總RNA樣品進行cDNA合成,即進行12次不同的反轉錄反應,從而...
(1)PCR引物:一般使用擴增HIVgag和/或pol和/或env和/或LTR等引物。進行RNA逆轉錄時可使用下游特異性引物或隨機引物。引物設計可參考文獻或自行設計,應儘量涵蓋常見的HIV流行毒株,也可使用兼併性引物。(2)主要試劑:包括核酸提取純化、逆轉錄、PCR所需的試劑。使用商品化核酸提取純化試劑、逆轉錄酶反應試劑和PCR...