核酸檢測,方法及程式,H產品,實驗室要求,意義,質量控制,參考文獻,
核酸檢測
隨著生物技術的發展,核酸檢測得到了人們越來越多的重視,它可直接檢查HIV RNA,可在發現血清學變化之前檢測HIV感染,而且比P24抗原檢測方法更靈敏。簡單的說就是病毒感染人體後，一般情況下可通過一系列檢測被發現，而最早能被檢測到的是病毒核酸。現有的酶聯免疫等血清學檢測方法檢測的是抗原或抗體，而核酸檢測技術檢測的是病毒核酸，所以能更早地發現病毒感染。HIV核酸檢測將愛滋病病毒的檢測“視窗期縮短至11天，並且核酸檢測這項技術目前可將B肝、C肝病毒的檢測“視窗期”分別由原來的50天、72天縮短到25天、59天。血液安全由此可得到更好保障。
方法及程式
HIV核酸定性檢測
1.1 方法和試劑
1.1.1 方法
（1）檢測方法為商品化試劑盒和實驗室自建方法，商品化試劑應嚴格按說明書操作。下面介紹的方法是實驗室自建方法，供參考。
（2）檢測血漿或血清樣品使用逆轉錄PCR（RT-PCR）方法，建議第一輪PCR擴增使用RT-PCR一步法；檢測血細胞或組織樣品使用PCR方法。一般使用擴增兩輪的套式PCR方法。
（3）設立陽性、陰性及空白對照。陽性對照為與待測樣品同質、含有目的基因的樣品；陰性對照為與待測樣品同質、不含有目的基因的樣品。陽性和陰性對照樣品應與待檢樣品處理程式一致。陰性對照的設定數量應根據實驗樣品的數量設定在不同的位置。
1.1.2 試劑
（1）PCR引物：一般使用擴增HIVgag和/或pol和/或env和/或LTR等引物。進行RNA逆轉錄時可使用下游特異性引物或隨機引物。引物設計可參考文獻或自行設計，應儘量涵蓋常見的HIV流行毒株，也可使用兼併性引物。
（2）主要試劑：包括核酸提取純化、逆轉錄、PCR所需的試劑。使用商品化核酸提取純化試劑、逆轉錄酶反應試劑和PCR擴增試劑。
（3）抗污染試劑：實驗室自建檢測方法可使用抗污染試劑，參考尿嘧啶DNA糖基化酶抗污染方法。
1.2 擴增目的基因片段
1.2.1 樣品的採集和處理
1.2.2 核酸提取
可使用矽膠柱離心、磁性矽膠顆粒分離方法以及自動化儀器等商品化試劑或設備並按說明書操作。提取RNA時應注意防止RNA降解。DNA應置於-20℃保存，RNA和需長期保存的DNA應置於-80℃保存。
1.2.3 逆轉錄合成cDNA
使用商品化試劑並按說明書操作。逆轉錄cDNA合成反應需使用逆轉錄引物、dNTPs、逆轉錄酶、RNA酶抑制劑、DTT、緩衝液和適量無RNA/DNA酶的超純水以及RNA模板。在擴增儀或水浴箱中，在規定的溫度和時間下進行逆轉錄反應。建議使用商品化RT-PCR一步法試劑進行第一輪擴增反應。
1.2.4 PCR擴增反應
使用商品化試劑按說明書操作。PCR反應需使用引物、dNTPs、DNA聚合酶（如Taq酶等）、緩衝液、和適量無RNA/DNA酶超純水、以及模板（DNA或cDNA）。在擴增儀中，按照設定的程式進行擴增。一般使用二次擴增的套式PCR擴增方法。
1.3 擴增產物分析及結果報告
1.3.1 擴增產物分析
擴增產物常用分析方法是瓊脂糖凝膠電泳法，與分子量標準比較，判斷擴增片段是否在預期的分子量範圍內。其它擴增產物分析方法還有限制性內切酶酶切分析、特異性探針雜交分析以及DNA序列分析等。自動化核酸擴增儀使用酶聯比色分析或螢光探針雜交等原理測定。
1.3.2 結果判定和報告
（1）實驗成立的條件：每一次檢測需同時做兩個陽性對照、兩個陰性對照，只有陽性對照擴增出預期的片段、陰性對照沒有擴增出任何片段、雙份平行樣品結果一致的情況下實驗才成立，可以作出核酸陽性或陰性反應結果的判定。
（2）HIV核酸檢測陽性：使用商品化檢測試劑，發現核酸陽性反應，應該重複採集樣品進行複測，複測結果呈核酸陽性反應則判定為核酸陽性，複測結果為核酸陰性反應則判為不確定結果，需進一步隨訪檢測。
（3）HIV核酸檢測陰性：只可報告本次實驗結果陰性。
（4）應在完成檢測後7個工作日內發出檢測報告。
HIV核酸定量檢測
2.1 方法
HIV核酸定量檢測主要基於靶核酸擴增RT-PCR和信號放大擴增兩種方法。國內常用的方法中，NucliSens Esay Q HIV-1 v1.1採用國際單位（IU/ml），與NASBA的拷貝數關係基本為1:1；Amplicor Cobas 的拷貝數約為1.2～1.5國際單位；bDNA方法的拷貝數約為0.8～1.0國際單位。不同方法的關係與HIV的亞型有關。
2.2 試劑
必須使用經中國藥品生物製品監督管理局註冊批准的商品化試劑並嚴格按說明書操作。
2.2.1 靶核酸擴增試劑和性能
（1）RT-PCR擴增試劑
1）Amplicor HIV-1 Monitor v1.5（RT-PCR微孔板捕獲比色分析法），核酸手工提取（異丙醇沉澱），比色分析測定。擴增靶核酸位置是gag基因區，可擴增HIV-1M組的A-K基因亞型。標準法的檢測線性範圍是400～750，000；超敏法的線性範圍是50～100，000 RNA拷貝/毫升。
2）COBAS Amplicor HIV-1 Monitor v1.5, 核酸手工提取（異丙醇沉澱），儀器測定。擴增靶核酸位置是gag基因區，可擴增HIV-1M組的A-H基因亞型。標準法的檢測線性範圍是400～750，000；超敏法的線性範圍是50～100，000 RNA拷貝/毫升。
3）COBAS AmpliPrep/COBAS Amplicor HIV-1 Monitor v1.5 （COBAS Amplicor 分析儀）,儀器提取核酸，儀器測定。擴增靶核酸位置是gag基因區，可擴增HIV-1M組的A-H基因亞型。標準方法的檢測線性範圍是400～1，000，000；超敏方法的線性範圍是50～100，000 RNA拷貝/毫升。
以上三種試劑均採用基於PCR擴增靶核酸檢測法，僅在設備的使用、自動化程度和樣品製備的方法有所不同。
4）COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1 Test（實時螢光探針RT-PCR分析法）, 儀器提取核酸,實時螢光探針PCR擴增儀器測定。擴增靶核酸位置是gag基因區，可擴增HIV-1M組的A-H基因亞型。檢測線性範圍是40～10，000，000 RNA拷貝/毫升，比上述三種方法的檢測線性範圍要寬，樣品可不經稀釋一次完成檢測。
以上四種試劑均使用一個內部定量標準品，1個陰性、1個弱陽性和1個強陽性外部外部質控品。均使用dUTP/UNG防污染試劑。
5）LCx HIV RNA Quantitative Assay（競爭性RT-PCR微顆粒酶免疫分析法）,手工或儀器提取核酸（活化矽膠柱純化），儀器測定。擴增靶核酸位置是pol（整合酶）基因區，可擴增HIV-1基因M組的A-G亞型和0組病毒，尤其可檢測M組C基因亞型和一些重組病毒。檢測線性範圍是50～1，000，000 RNA 拷貝/毫升；使用一個內部定量標準品和六個外部定量標準品。
6）RealTime HIV-1 Assay（實時螢光探針RT-PCR分析法）,使用獨特的雙鏈螢光探針。手工或儀器提取核酸（磁性顆粒純化），儀器測定。擴增靶核酸位置是pol（整合酶）基因區，擴增HIV-1基因亞型是M組的A-G亞型和0組以及N組病毒。檢測線性範圍是40～1，000，000 RNA 拷貝/毫升。使用一個內部定量標準品。檢測結果與LCx HIV RNA Quantitative Assay結果高度相關。
（2）基於核酸序列擴增試劑（NASBA擴增技術）：以等溫方式直接擴增HIV-1 RNA。
NucliSens Esay Q HIV-1 v1.1（實時螢光探針分析法）, 使用螢光標記的分子信標探針技術檢測擴增子。手工或儀器提取核酸（矽膠純化，異丙醇沉澱）,儀器測定。擴增靶核酸位置是gag基因區，擴增HIV-1基因亞型是M組的A-G亞型。檢測線性範圍是50～3，000，000 RNA 國際單位/毫升；使用一個內部定量標準品，沒有陰陽性外部外部質控品。每次檢測8的整數倍樣品，直至48個。檢測結果與Versant HIV-1 RNA、和Amplicor HIV-1 Monitor v1.5 方法的結果有著高度的相關性。國際上已經推薦使用V2.0試劑盒。
2.2.2 信號放大擴增試劑和性能
Versant HIV-1 RNA 3.0.bDNA（分枝狀DNA探針雜交微孔板捕獲比色分析法）, 利用分枝狀DNA多級信號放大原理。無需RNA純化和PCR擴增步驟。離心濃縮病毒子並用去垢劑和蛋白酶K消化病毒釋放病毒RNA，儀器測定。擴增靶核酸位置是pol基因區，擴增HIV-1基因亞型是M組的A-H亞型，檢測線性範圍是50～500，000 RNA 拷貝/毫升；使用六個外部定量標準品，1個陰性、1個弱陽性和1個強陽性外部外部質控品。每次可檢測12的整數倍樣品。
以上試劑均可使用EDTA和ACD作為樣品的抗凝劑，NucliSens HIV-1 QT和NucliSens Esay Q HIV-1 v1.1以及Versant HIV-1 RNA 3.0.bDNA試劑還可以使用肝素作為抗凝劑。如果必須使用經肝素處理的血漿樣品進行RT-PCR擴增，則必須在樣品中直接加肝素酶消化肝素。
2.2.3 實時螢光定量PCR技術
實時螢光定量PCR技術，是指在PCR反應體系中加入螢光基團，利用螢光信號積累實時監測整個PCR進程，最後通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。每個反應管內的螢光信號到達設定的域值時所經歷的循環數Ct值與該模板的起始拷貝數的對數存線上性關係。利用已知起始拷貝數的標準品可作出標準曲線，其中橫坐標代表起始拷貝數的對數，縱坐標代表Ct值）。因此，只要獲得未知樣品的Ct值，即可從標準曲線上計算出該樣品的起始拷貝數。
實時螢光定量PCR擴增的實驗檢測過程可分為：（1）樣品製備,抽提和濃縮目標RNA分子，並除去可能存在的抑制因子。（2）Real-time PCR，檢測PCR的產物使用螢光標記的寡核苷酸探針。檢測的原理基於螢光信號增長曲線與循環數相關。（3）RT-PCR反應，病毒RNA利用逆轉錄酶將RNA逆轉錄為cDNA，然後通過DNA聚合酶對特定片段進行擴增。（4）擴增產物的檢測，基於檢測閾值的設定，當病毒載量高時，低循環數即能檢測到螢光信號，當病毒載量低時，高循環數時才能檢測到螢光。循環數與樣品載量成線性關係。利用標準品製作循環數與載量的標準曲線就能對樣品載量進行定量檢測。
集合核酸定性檢測 （Pooling PCR）
使用集合核酸擴增檢測技術和方法，利用核酸檢測方法的高度敏感性，對高度懷疑感染人群且抗體陰性的樣品進行集合核酸檢測，可及時發現視窗期感染者。該方法較單份樣品的核酸檢測具有更高的成本效益。
3.1 樣品集合程式
3.1.1 根據預處理樣品量，計算預形成一級和二級集合數量，在登記表格上記錄一級和二級集合及對應的原始樣品編號。
3.1.2 吸取130mL樣品，移入標記二級集合的離心管中；10份樣品形成一個1300mL的二級集合樣品，充分渦旋震盪混勻。
3.1.3 從5個二級集合管中分別吸取210mL樣品，移入標記有一級集合的離心管中，形成由50份樣品1050mL體積組成的一級集合樣品，充分渦旋震盪混勻。
3.1.4 從每個一、二級集合管中吸取500mL集合樣品，分裝至另一相應標記的離心管，用超敏感核酸檢測試劑進行檢測。
3.1.5 製備陰性集合外部質控品：使用50份HIV抗體和核酸陰性樣品，按上述步驟，分別集合成5個陰性二級集合外部質控品和1個一級集合外部質控品。
3.1.6 製備陽性集合外部質控品：從9份HIV抗體和核酸陰性樣品和一份至少含有HIV RNA10c/ml陽性樣品中，分別移取130mL加入離心管中，形成一個1300mL的陽性二級集合外部質控品。再分別從4個已製備好的陰性二級集合外部質控品和上述陽性二級集合外部質控品中，移取210mL至標記為一級陽性集合外部質控品的離心管中，形成一級陽性集合外部質控品。
3.1.7 一級和二級陰、陽性集合外部質控品分別用於RT-PCR中每一輪一級和二級集合樣品的檢測。
3.2 集合樣品的檢測和分解路線
使用商品化核酸檢測試劑，應嚴格按照試劑說明書操作。按照各商品化核酸試劑集合PCR的方案進行檢測，集合樣品的數量根據各試劑方案操作。方法簡述如下：
3.2.1 用HIV RNA RT-PCR超敏檢測方法對一級集合樣品進行檢測，陽性反應的一級集合樣品進入下一檢測步驟。
3.2.2 用HIV RNA RT-PCR超敏檢測方法對所有組成陽性一級集合的二級集合樣品進行檢測，陽性反應的二級集合樣品進入下一檢測步驟。
3.2.3 用HIV RNA RT-PCR標準檢測方法檢測所有組成陽性二級集合樣品的的10份單個樣品，確定核酸陽性的單個樣品。
嬰幼兒HIV感染核酸檢測
HIV感染產婦所生嬰幼兒在出生後18個月內可套用HIV核酸（DNA或RNA）檢測進行早期HIV感染診斷。儘管HIV RNA檢測敏感性在感染早期較高（出生後1個月內），但是HIV DNA檢測不受母親圍產期抗逆轉錄病毒治療和人乳汁中抗逆轉錄病毒藥物以及嬰幼兒預防性抗逆轉錄病毒治療的干擾而影響早期診斷。另外，考慮母親血液污染因素，不推薦使用臍帶血進行HIV核酸檢測。嬰幼兒的抗體檢測流程和結果判斷見第二章（HIV抗體檢測）。
4.1 適用範圍
未滿18個月的HIV感染產婦所生嬰幼兒；未滿18個月的嬰幼兒，其母親HIV感染狀態不詳，兒童出現HIV相關臨床表現，臨床懷疑HIV感染者。
4.2 檢測程式及結果報告
4.2.1 於嬰兒出生後6周（42天）採集第一份血樣本（血樣本可製備成DBS或EDTA抗凝全血），送檢。
4.2.2 若第一份血樣本檢測呈陽性反應，儘快再次採集第二份血樣本進行檢測。若兩份血樣本檢測均呈陽性反應，報告“嬰兒HIV感染早期診斷檢測結果陽性”，診斷兒童HIV感染。及時對HIV感染兒童進行追蹤和病情監測，將其轉介到兒童抗病毒治療醫療服務機構，並為其提供機會性感染預防等服務措施；若第二份血樣本檢測呈陰性反應，待嬰兒滿3個月再次採集血樣本進行檢測。若第一份血樣本檢測呈陰性反應，繼續提供兒童保健和隨訪服務，待嬰兒滿3個月再次採集血樣本進行檢測。
4.2.3 若嬰兒滿3個月再次檢測呈陰性反應，報告“嬰兒HIV感染早期診斷檢測結果陰性”，按照未感染兒童處理，繼續提供兒童保健隨訪服務；於兒童滿12個月時，按照“HIV感染產婦所生兒童HIV抗體檢測流程”（圖4），開始HIV抗體檢測，最終確定兒童感染狀態。若嬰兒滿3個月再次檢測呈陽性反應，儘快再次採集血樣本進行檢測。第三份血樣本檢測呈陽性反應，報告“嬰兒HIV感染早期診斷檢測結果陽性”；若第三份血樣本檢測呈陰性反應，報告“嬰兒HIV感染早期診斷檢測結果陰性”；分別按照前述流程提供相應服務。
4.2.4 不同時間“嬰兒HIV感染早期診斷”檢測均呈陰性反應的餵哺母乳的兒童，應在完全停止餵哺母乳後的6周和3個月（若6周時檢測結果為陽性可儘快）再次採血進行核酸定性檢測，進行早期診斷。兒童滿18個月後則可直接進行抗體檢測。
4.2.5 如果嬰兒第一次採血時已滿3個月，但未滿12個月，則應儘快在不同時間採集兩份血樣本；同時將兩份血樣本送檢，按照前述流程進行檢測。如果兒童第一次採血時已滿12個月，則應首先按照“愛滋病感染產婦所生兒童HIV抗體檢測流程”（ 圖4）進行HIV抗體檢測。若兩種不同原理或廠家生產的HIV抗體檢測試劑檢測結果均為陰性，則排除兒童感染；若HIV抗體檢測試劑檢測結果呈陽性反應，不能通過抗體檢測確定兒童感染狀態，則可在不同時間採集兩份血樣本，按照前述流程進行“嬰兒HIV感染早期診斷”檢測。如果兒童第一次採血時已滿18個月，則應按照HIV抗體檢測流程（圖1）進行HIV抗體檢測，無需進行“嬰兒HIV感染早期診斷”檢測。
H產品
HIV核酸檢測目前核酸DNA跟核酸RNA.
實驗室要求
HIV核酸檢測應在合適的實驗室中進行，應建立與實驗和實驗室管理相關的標準操作指導書和制定嚴格的管理制度，工作人員必須充分了解各項規定並嚴格遵照執行。
實驗室分區和功能
實驗室應設定兩個獨立的工作區域：核酸擴增前區和核酸擴增後區。核酸擴增前區包
括試劑準備區和樣品處理區，設在不同房間或區域；核酸擴增後區包括擴增區和擴增產物分析區，設在不同的房間或區域。各區的功能是：
1.1 試劑準備區：擴增試劑的儲備、配製和分裝。
1.2 樣品處理區：樣品登記、處理和分裝；核酸提取、保存和使用，PCR擴增的第一輪加樣。
1.3 擴增區：核酸擴增。如果在此區進行套式PCR的第二輪加樣，應在PCR防護罩內進行。
1.4 擴增產物分析區：擴增產物的電泳、雜交、成像、序列測定、結果分析、登記及報告。
在滿足下列要求的前提下，核酸擴增前區或核酸擴增後區可設在一個房間內：
1.4.1 核酸擴增前區實驗室內設定兩個不同位置的實驗區，試劑配置在超淨工作檯中操作，樣品處理在生物安全櫃內操作。
1.4.2 在核酸擴增後區使用全封閉的擴增和檢測系統時，如實時螢光PCR儀等。
1.4.3 每個實驗人員使用各自的試劑、耗材、移液器和盛放污染物的盛器。
1.4.4 在實驗前後對操作區域和共享器具進行清潔及消毒。
1.4.5 各區域的試劑、器具、儀器和設備為該區專用，不得交叉使用。
.實驗室人員和要求
進行HIV核酸檢測的人員須具有愛滋病檢測實驗室的上崗資格，接受過省級以上的實驗操作技術及愛滋病實驗室生物安全培訓及廠家的培訓。
.實驗室設施和設備
3.1 根據檢測項目配備相應的設施和設備。
3.2 各區域的設施和設備為專用，應根據實驗要求在相應區域配置。
3.3 試劑準備區：配置冰櫃、超淨工作檯、普通離心機、加樣器、振盪器、廢棄物容器、可移動紫外燈。
3.4 樣品處理區：配置-80℃冰櫃、生物安全櫃、高速製冷離心機、加樣器、振盪器、製冰器或製冷模組、恆溫水浴或乾浴、上下水設備、廢棄物容器、紫外燈。
3.5 擴增區：配置核酸擴增儀、普通冰櫃、無層流PCR操作櫃或超淨工作檯、微型離心機、加樣器、廢棄物容器、紫外燈。
3.6 擴增產物分析區：配置電泳儀、電泳槽、加樣器、紫外透射儀、攝影/像設備、普通冰櫃、普通離心機、恆溫水浴、微波爐、上下水設備、廢棄物容器、紫外燈等。測序儀可安置在其他專門實驗區。
3.7 各區域應使用專用或一次性工作服、帽子、口罩鞋套及袖套，配備防紫外線眼鏡。
實驗室生物安全
必須符合愛滋病實驗室的通用生物安全要求。5 .防止核酸殘餘污染措施 5.1 嚴格執行實驗室分區制度,防止實驗室核酸殘餘（Carry-over）污染措施
5.2 各區域只用於特定的操作，不得從事其它工作。
5.3 儀器和材料的專用制度
儀器、設備、材料、設施均應按工作區域進行標識，不得交叉混用。
5.4 單向工作流向制度
5.4.1 實驗室的氣流應從擴增前區流向擴增後區，不得逆向流動。建議擴增前區保持弱正壓狀態，擴增後區保持弱負壓狀態。
5.4.2 實驗人員單向工作流向應該為：試劑準備區→樣品處理區→擴增區→擴增產物分析區，不得逆向流動。原則上實驗人員在擴增後區工作後當天不能再返回擴增前區工作。
5.4.3 實驗用品單向工作流向應該為：試劑準備區→樣品處理區→擴增區→擴增產物分析區，不得逆向流動。實驗用品包括實驗材料（試劑、樣品和擴增產物）、實驗器材（容器、板架、實驗服、帽子、口罩、手套、鞋套）、辦公用品（記錄紙、筆等）、以及清潔材料等。
5.5 實驗室防止核酸殘餘污染的處理程式
5.5.1 實驗前將70%乙醇或0.1～1%次氯酸鈉溶液或塗布於操作台或器具表面，兩分鐘後用紙巾擦淨。
5.5.2 實驗前移入所需的試劑、耗材、樣品以及盛放污染物的盛器。
5.5.3 用於定性與定量核酸檢測的所有試劑、耗材、移液器等必須分開使用。實驗結束後取出個人專用物品至存放區；封閉污染物盛器並置入污物袋；取出共用器具至存放區；將70%乙醇或0.1～1%次氯酸鈉溶液塗布於操作台或器具表面，兩分鐘後用紙巾擦淨；打開紫外燈照射至少1小時。
5.5.4 定期（每周）對實驗室進行全面清潔，房間內所有工作檯面、地面以及儀器設備表面用70%乙醇或0.1～1%次氯酸鈉清潔，用紫外燈進行台面和空氣消毒。定期（每月）對移液器進行清潔。
5.5.5 定期（每月）監測和報告實驗室核酸殘餘污染情況，監測部位包括核酸檢測前後區域各實驗室以及共用走廊等。
5.5.6 每次試驗後，將同批試驗樣品的DNA序列以及與上一批試驗樣品的DNA序列一起進行遺傳進化樹污染分析。
廢棄物處理制度
6.1 所有廢棄物應按照HIV污染物品處理。
6.2 化學物品如溴乙啶處理的瓊脂糖凝膠應該按有關方案處理。
意義
早期診斷
嬰兒的早期診斷：HIV感染母親所生小於18個月齡的嬰兒，不同時間的兩次HIV核酸檢測均為陽性即可作出診斷。18個月齡以上兒童診斷與成人相同：有急性HIV感染綜合症或流行病學史，且不同時間的兩次HIV核酸檢測結果均為陽性，即可診斷。
也可使用多樣品集合的方法，對采供血機構的原料血漿以及HIV抗體陰性的高危人群樣品進行集合核酸檢測，及時發現視窗期感染，降低“殘餘危險度”，減少二代傳播。
疑難樣本的輔助診斷
在一般情況下，HIV抗體檢測足以對HIV感染與否做出正確診斷，但在特殊情況下，單純HIV抗體檢測結果不能進行明確的診斷，如在感染早期或疾病終末期出現抗體不確定反應時，RNA的測定結果可幫助提供HIV感染早期或終末期的證據。由於試劑的靈敏度、接受有效的抗病毒治療後以及存在長期低水平病毒的少數感染者等原因，應對其它檢測數據和樣品背景情況進行綜合判斷。
遺傳變異監測
可用於HIV分子流行病學監測，包括HIV-1和HIV-2感染的鑑別診斷、HIV感染傳播鏈的分析、HIV基因亞型和重組病毒的鑑定和分析以及人群HIV遺傳變異趨勢的監測。
耐藥性監測
可用於HIV耐藥檢測和監測，指導公共衛生醫生了解耐藥性病毒株流行的態勢和指導臨床醫生判斷抗病毒治療效果和修改抗病毒治療方案。
病程監控及預測
HIV感染髮生後病毒載量變化具有一定規律，這種變化與疾病的進程有著密切的相關性。因此定期進行病毒載量檢測有助於確定疾病發展的階段，以確定相應的治療方案。
HIV病毒載量與6年發病率的關係為：病毒載量<500c/ml時發病率為5.4%；501～3，000c/ml時為16.6%，3，001～10，000c/ml時為31.7%；10，001～30，000c/ml時為55.2%；>30，000c/ml時則為80%。當HIV感染者CD4+T細胞計數<200/μl時，病毒載量與3～6個月發展至AIDS的危險為：病毒載量<10，000c/ml時發病率為4.9%；10，000～29，999c/ml時為12.7%；30，000～99，990c/ml時為17.7%；>100，000c/ml時為22.4%。
指導抗病毒治療及療效判定
通常在病毒載量達到一定水平後（如>35，000～50，000c/ml）抗病毒治療才顯示良好的治療效果。治療後，通過病毒水平的檢測能夠確定治療是否有效。通常在治療6個月後病毒水平降低0.5 log以上才被認為臨床有效。
質量控制
質量控制要考慮從樣品接收到發出報告整個過程每個環節的管理過程，包括：（1）人員；（2）實驗室分區和環境；（3）儀器；（4）檢測過程（試劑、操作過程，外部質控品使用）。
所有相關檢驗人員需經操作培訓，能獨立熟練地操作，並經考核合格，持證上崗。
1 實驗室分區和環境
HIV-1病毒載量檢測實驗室原則上應分為三個獨立工作區：試劑準備區、樣品處理區、擴增產物分析區，並設在不同房間。嚴格要求三區的空氣流向：從試劑準備區到樣品處理區，然後到擴增產物分析區，不能逆向流動。
2 儀器設備質量控制
加樣器、溫濕度計須經計量部門校準，每年一次；HIV-1病毒載量檢測儀、實時螢光PCR儀、離心機可以委託公司校準，每年一次。冰櫃、水浴箱用校準合格的溫度計測量溫度，並做好記錄。
3 檢測過程質量控制
保證所有試劑盒有效並經國家食品藥品監督管理局註冊，使用無DNA和RNA酶的水；嚴格執行儀器和試劑的標準操作程式（SOP），不得擅自修改。每次實驗需同時使用試劑盒內的外部質控品以及一個HIV-1 RNA為5000～15000拷貝/毫升的外部外部質控品；每次實驗按照試劑盒說明書的要求使用試劑盒提供的外部質控品，並滿足外部質控品的要求。
4 外部質量控制
國家愛滋病參比實驗室每年組織兩次病毒載量的能力驗證項目，每次5個樣品。
參考文獻
Butcher A, Spadoro J: Using PCR for detection of HIV-1 Infection. Clin Imm Newsletter, 1992，12:73－76.
Guidelines for the Use of Antiretroviral HIV-Infected Adults and Adolescents MMWR Recommendations and Reports April 24, 1998/47（RR-5）; 42-82.
Bayer HIV-1 RNA3.0 Assay （bDNA） Operation manual Rev.2006-07
Roche AMPLICOR HIV MONITOR™ TEST Procedure Manual,version 1.5
Nuclisens ® EasyQHIV-1 Operation Manual, V1.0-2, 2002-05
Fractions of HIV-1 Seropositive Persons by Two Nucleic Acid Amplification Assays, AIDS Research and Human Retrovirus 1993，9:259-265.
《HIV-1病毒載量測定及質量保證指南（試行）》 （（中國疾病預防控制中心，2008年2月）
全國愛滋病檢測技術規範（2009年修訂版 ）
