錨定PCR（Anchored PCR）常用於擴增已知一端序列的目的DNA。在未知序列一端加上一段多聚dG的尾巴，然後分別用多聚dC和已知的序列作為引物進行PCR擴增。
基本介紹
- 中文名：錨定PCR
- 外文名：Anchored PCR
- 釋義：用於擴增已知一端序列的目的DNA
- 主要用於：分析具有可變末端的DNA序列，
以基因組DNA為模板，用一條基因特異性引物GSP1進行線性PCR擴增，產生單鏈擴增產物。
在末端轉移酶TdT的作用下，在單鏈DNA分子的3'-末端加上多聚胞嘧啶（PolyC）。
用巢式基因特異性引物GPS2和能夠與多聚胞嘧啶配對的錨定引物AAP對加尾的產物進行PCR擴增，將PCR產物連線到載體後進行序列測定，可以得到基因序列上游的未知序列。
AAP：GGCCACGCGTCGACTAGTACGGGIIGGGIIGGGIIG,I為次黃嘌呤核苷，多聚G上游包含Mlu I, Sal I 和 Spe I三個酶切位點。
錨定PCR主要用於分析具有可變末端的DNA序列，Loh等用A-PCR對人外周血淋巴細胞T細胞受體α-鏈的mRNA的多變性進行了分析。先合成cDNA，並用末端脫氧核苷酸轉移酶在其3’-可變區末端加上一個PolyG尾巴。Loh等恆定區與可變區連線部位設一個引物，另一個引物是一個具5’-polyG尾巴的引物。帶有PolyG尾巴的引物是一個固定點，它可以並與PolyG尾巴結合，無論其餘部分序列如何，只識別片段末端，利用此法可從前述mRNA中檢出至少20種不同序列，每一種都是獨特的，表明A-PCR不對任何特殊序列有傾向性結果，可用於T細胞、腫瘤及其它部位抗體基因的研究。
