β-內醯胺酶檢測

β-內醯胺酶是金黃色葡萄球菌和淋球菌等多種細菌產生的一種抗生素滅活酶，能裂解青黴素和頭孢菌素等β-內醯胺類抗生素的β-內醯胺環，使其變成無抗菌活性的物質，從而表現為產酶細菌對這類抗生素耐藥。由於β-內醯胺酶檢測速度快，所以檢測β-內醯胺酶與常規藥敏實驗相比，能更快地獲得結果。檢測β-內醯胺酶的方法有酸度法和碘測定法。

基本介紹

• 中文名：β-內醯胺酶檢測
• 臨床意義：檢測抗生素耐藥性

實驗材料

1.菌種

臨床分離的金黃色葡萄球菌（MIC≤0.12μg/ml或抑菌圈直徑≥29mm）、流感嗜血桿菌；標準菌株：金黃色葡萄球菌ATCC29213、糞腸球菌ATCC29212的18～24小時培養物。

2.試劑

頭孢硝噻吩紙片等。

3.其他

無菌生理鹽水、一次性接種環、無菌滴管和平皿等。

實驗原理

酸測量法：青黴素被β-內酶胺酶水解後成青黴素酸，pH值下降到6.8以下，用酚紅指示劑，由紅(紫)色 (原液：枸櫞酸緩衝液pH8.5) →黃色(pH6.8以下)；澱粉-碘測定法：β內醯胺酶破壞β內醯胺環，碘與被打開β內醯胺環結合，使藍色的澱粉-碘複合物轉變成無色。β-內醯胺酶是多種不同類型以β-內醯胺類抗菌藥物為底物的降解酶，通過水解β-內醯胺環造成β-內醯胺類藥物失去活性，將待測菌與頭孢硝噻吩作用一定時間後，如待測菌產生青黴素酶，則可水解頭孢硝噻吩的β-內醯胺環，顏色由黃色變為紅色。

臨床意義

1.細菌產生β-內醯胺酶可使易感抗生素水解而滅活。

2.對革蘭陰性菌產生的β-內醯胺酶穩定的廣譜青黴素和第二、三代頭孢菌素，其耐藥機制不是由於抗生素被β-內醯胺酶水解，而是由於抗生素與大量的β-內醯胺酶結合，使其停留於胞膜外間隙中，不能進入靶位發生抗菌作用。

3.青黴素結合蛋白（PBPs）靶蛋白與抗生素親和力降低，PBPs增多或產生新的PBPs均可使抗菌藥物失去抗菌作用。

4.細菌的細胞壁或外膜的通透性改變，使抗生素不能或很少進入細菌體內到達作用靶位，革蘭陰性菌的外膜是限制β-內醯胺類抗生素透入菌體的第一道屏障。銅綠假單胞菌對β-內醯胺類抗生素耐藥性是由於外膜非特異性孔道蛋白缺陷所致的。

注意事項

挑取細菌時，菌量不要太多，儘量在紙片上塗布開。