《CD73在動脈粥樣硬化斑塊破裂中的作用及其機制研究》是依託復旦大學，由周平擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：CD73在動脈粥樣硬化斑塊破裂中的作用及其機制研究
- 依託單位：復旦大學
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：周平
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
動脈粥樣硬化斑塊破裂是急性冠狀動脈綜合徵（ACS）最重要的始動環節。CD73在動脈粥樣硬化斑塊發展中的作用日益受到重視。本課題組前期研究發現CD73-/-小鼠血管內皮細胞血管新生能力降低,CD73高表達可以促進MB-MDA-231細胞MMP2/9的活化及表達,因此構想 CD73可通過促進斑塊內血管新生、MMPs分泌而導致斑塊破裂。首先本課題將構建CD73和ApoE雙基因敲除小鼠，建立CD73-/-ApoE-/-小鼠動脈粥樣硬化斑塊破裂模型，體內研究CD73對粥樣斑塊破裂、血管新生、MMPs、TIMPs分泌的影響；其次原代培養上述小鼠血管內皮細胞、平滑肌細胞、巨噬細胞,觀察CD73與血管新生、MMPs、TIMPs分泌的關係並探討腺苷受體通路；最後利用蛋白組學及轉錄因子晶片技術研究CD73調控的未知蛋白。以期闡明CD73在動脈粥樣硬化斑塊破裂中的作用及機制，為ACS提供新的防治途徑。
結題摘要
CD73是由GPI錨定在細胞膜外表面的糖蛋白。其主要功能是水解AMP生成腺苷。研究發現CD73基因敲除小鼠動脈新生內膜形成伴隨巨噬細胞增多以及VCAM-1 表達增多，CD73可以抑制血小板活化以及單核細胞與內皮細胞的黏附。CD73還參與細胞中脂滴形成過程。提示CD73在動脈粥樣硬化(AS)的發生髮展過程中可能發揮著重要作用，但是如何發揮作用及其作用機制目前國內外鮮有報導。 本研究分三部分： 一、體內實驗研究CD73在AS中的作用。培育CD73-/-ApoE-/-雙敲小鼠，高脂餵養建立AS模型。結果顯示，CD73-/-ApoE-/-小鼠體重、血漿甘油三酯、總膽固醇、低密度脂蛋白明顯低於ApoE-/-小鼠。CD73-/-ApoE-/-小鼠動脈粥樣斑塊總面積占血管總面積的比例明顯低於ApoE-/-小鼠。兩組小鼠肝臟中的脂質代謝關鍵酶的基因水平變化顯示，ApoE-/-CD73-/-小鼠的LCAT和CYP7A1 mRNA水平明顯高於ApoE-/-小鼠，HL、PPARα、PPARγ、FDPS的mRNA水平明顯低於ApoE-/-小鼠。 二、培養野生型和CD73-/-小鼠的原代肝細胞，探討CD73在AS發生髮展中的作用機制。實驗發現， CD73-/-小鼠原代肝細胞內膽固醇水平明顯降低。腺苷和CD73的特異性酶抑制劑（APCP）分別能升高和降低胞內膽固醇水平。 三、培養人臍動脈平滑肌細胞（HUASMC），利用RNA干擾技術抑制CD73表達，觀察CD73對HUASMC的炎症因子釋放、遷移、增殖能力的影響。結果表明：①siRNA抑制CD73的表達，顯著升高IL-8和MCP-1的mRNA水平。干擾CD73後細胞上清中的MCP-1水平顯著升高。②siRNA使MMP-1mRNA水平顯著升高。腺苷和APCP分別能夠抑制和促進HUASMC的遷移。③siRNA使HUASMC的增殖能力下降。 綜上得出以下結論：1.CD73與AS形成有關，可促進動脈粥樣斑塊形成和體內血脂水平升高；2.CD73可以提高小鼠原代肝細胞內膽固醇水平，其作用機制與CD73產生的腺苷有關；3.CD73可以抑制HUASMC炎症因子釋放和遷移能力，促進HUASMC的增殖能力。 本課題首次提出並探討了CD73對原代肝細胞和平滑肌細胞的影響，為CD73在AS中的研究提供了新的思路。我們的研究為CD73作為AS防治的新靶點提供了理論基礎。
