重組人白介素2

重組人白介-素2(rhIL-2)是基因重組產品, 是一種非糖基化蛋白，生物活性與天然IL-2 相同，含有133個胺基酸殘基,相對分子質量為15·5 k,其藥理作用在於增強免疫應答。重組人IL-2。1992年在美國經FDA 批准上市，商品名為 Proeukin。 此後相繼在日本、丹麥等國家上市，批准的臨床套用適應證為腎癌、血管肉瘤和黑色素瘤。

基本介紹

• 中文名：重組人白介素-2
• 外文名： Recombinant Human Interleukin-2
• 相對分子質量：15500

藥典標準

定義、組成及用途

本品系由高效表達人白細胞介素-2（簡稱人白介素-2）的大腸桿菌，經發酵、分離和高度純化後獲得的重組人白介素-2製成。合適宜穩定劑，不含防腐劑和抗生素。

基本要求

生產和檢定用設施、原材料及輔料、水、器具、動物等應符合“凡例”的有關要求。

製造

1工程菌菌種

1.1 名稱及來源

重組人白介素-2工程菌株系由帶有人白介素-2基因的重組質粒轉化的大腸桿菌菌株。

1.2 種子批的建立

應符合“生物製品生產檢定用菌毒種管理規程”的規定。

1.3 菌種檢定

主種子批與工作種子批的菌種應進行以下各項全面檢定。

1.3.1 劃種LB瓊脂平板

應呈典型大腸桿菌集落形態，無其他雜菌生長。

1.3.2 染色鏡檢

應為典型的革蘭氏陰性桿菌。

1.3.3 對抗生素的抗性

應與原始菌種相符。

1.3.4 電鏡檢查（工作種子批可以免做）

應為典型大腸桿菌形態，無支原體、病毒樣顆粒及其他微生物污染。

1.3.5 生化反應

應符合大腸桿菌生化反應特性。

1.3.6 人白介素-2表達量

在搖床中培養，應不低於原始菌種的表達量。

1.3.7 質粒檢查

該質粒的酶切圖譜應與原始重組質粒的相符。

1.3.8 目的基因核苷酸序列檢查（工作種子批可免做）

目的基因核苷酸序列應與批准的序列相符。

2原液

2.1 種子液製備

將檢定合格的工作種子批菌種接種於適宜的培養基（可含適量抗生素）中培養。

2.2 發酵用培養基

採用適宜的不含抗生素的培養基。

2.3 種子液接種及發酵培養

2.2.3.1 在滅菌培養基中接種適量種子液。

2.2.3.2 在適宜的溫度下進行發酵，應根據經批准的發酵工藝進行，並確定相應的發酵條件，如溫度、pH值、溶解氧、補料、發酵時間等。發酵液應定期進行質粒丟失率檢查（2010年版藥典三部附錄ⅨG）。

2.4 發酵液處理

用適宜的方法收集、處理菌體。

2.5 初步純化

採用經批准的純化工藝進行初步純化，使其純度達到規定的要求。

2.6 高度純化

經初步純化後，採用經批准的純化工藝進行高度純化，使其達到3.1項要求，即為重組人白介紊-2原液。加入適宜穩定劑，除菌過濾後於適宜溫度下保存，並規定其有效期。

2.7 原液檢定

按3.1項進行。

3半成品

3.1 配製與除菌

3.1.1 稀釋液配製

按經批准的配方配製稀釋液。配製後應立即用於稀釋。

3.1.2 稀釋與除菌

將檢定合格加穩定劑的重組人白介素-2原液用2.3.1.1項稀釋液稀釋至所需濃度。除菌過濾後即為半成品，保存於2～8℃。

3.2 半成品檢定

按3.2項進行。

4成品

4.1 分批

應符合“生物製品分批規程”規定。

4.2 分裝

應符合“生物製品分裝和凍乾規程”及2010年版藥典三部附錄ⅠA有關規定。

4.3 規格

應為經批准的規格。

4.4 包裝

應符合“生物製品包裝規程”及2010年版藥典三部附錄Ⅰ A有關規定。

檢定

1原液檢定

1.1 生物學活性

依法測定（2010年版藥典三部附錄ⅩD）。

1.2 蛋白質含量

依法測定（2010年版藥典三部附錄ⅥB第二法）。

1.3 比活性

為生物學活性與蛋白質含量之比，每1mg蛋白質應不低於1.0×10IU。

1.4 純度

1.4.1 電泳法

依法測定（2010年版藥典三部附錄ⅣC）。用非還原型SDS-聚丙烯醯胺凝膠電泳法，分離膠膠濃度為15%，加樣量應不低於10μg（考馬斯亮藍R250染色法）或5μg（銀染法）。經掃瞄器掃描，純度應不低於95.0%。

1.4.2 高效液相色譜法

依法測定（2010年版藥典三部附錄ⅢB）。色譜柱以適合分離分子質量為5～60kD蛋白質的色譜用凝膠為填充劑；流動相為0.1mol/L磷酸鹽－0.1mol/L氯化鈉緩衝液，pH7.0（含適宜的表面活性劑）；上樣量應不低於20μg，在波長280nm處檢測，以人白介素-2色譜峰汁算的理論板數應不低於1500。按面積歸一化法計算，人白介素-2主峰面積應不低於總面積的95.0%。

1.5 分子量

依法測定（2010年版藥典三部附錄Ⅳ C）。用還原型SDS-聚丙烯醯胺凝膠電泳法，分離膠膠濃度為15%，加樣量應不低於1.0μg，製品的分子質量應為15.5kD±1.6kD。

1.6 外源性DNA殘留量

每1次人用劑量應不高於10ng（2010年版藥典三部附錄Ⅸ B）。

1.7 宿主菌蛋白質殘留量

應不高於蛋白質總量的0.10%（2010年版藥典三部附錄Ⅸ C）。

1.8 殘餘抗生素活性

依法測定（2010年版藥典三部附錄Ⅸ A），不應有殘餘氨苄西林或其他抗生素活性。如製品中含有SDS．應將SDS濃度至少稀釋至0.01%再進行測定。

1.9 細菌內毒素檢查

每100萬IU應小於10EU（2010年版藥典三部附錄ⅫE凝膠限度試驗）。如製品中含有SDS，應將SDS濃度至少稀釋至0.0025%再進行測定。

1.10 等電點

主區帶應為6.5～7.5，且供試品的等電點圖譜應與對照品的一致（2010年版藥典三部附錄Ⅳ D）。

1.11 紫外光譜

用水或生理氯化鈉溶液將供試品稀釋至約100～500μg/ml，在光路1cm、波長230～360nm下進行掃描，最大吸收峰波長應為277nm±3nm（2010年版藥典三部附錄ⅡA）。

1.12 肽圖

依法測定（2010年版藥典三部附錄ⅧE），應與對照品圖形一致。

1.13 N端胺基酸序列（至少每年測定1次）

用胺基酸序列分析儀測定，N端序列應為：

（Met）-Ala-Pro-Thr-Ser-Ser-Ser-Thr-Lys-Lys-Thr-Gln-Leu-Gln-Leu-Glu。

2半成品檢定

2.1 細菌內毒素檢查

每100萬IU應小於10EU（2010年版藥典三部附錄Ⅻ E凝膠限度試驗）。如製品中含有SDS，應將SDS濃度至少稀釋至0.0025%再進行測定。

2.2 無菌檢查

依法檢查（2010年版藥典三部附錄Ⅻ A），應符合規定。

3成品檢定

3.1 鑑別試驗

按免疫印跡法（2010年版藥典三部附錄Ⅷ A）或免疫斑點法（2010年版藥典三部附錄Ⅷ B）測定，應為陽性。

3.2 物理檢查

3.2.1 外觀

應為無色或微黃色澄明液體。

3.2.2 可見異物

依法檢查（2010年版藥典三部附錄ⅤB），應符合規定。

3.2.3 裝量

依法檢查（2010年版藥典三部附錄Ⅰ A）．應不低於標示量。

3.3 化學檢定

3.3.1 pH值

應為3.5～4.5（2010年版藥典三部附錄Ⅴ A）。

3.3.2 滲透壓摩爾濃度

依法測定（2010年版藥典三部附錄Ⅴ H），應符合批准的要求。

3.4 生物學活性

應為標示量的80%～150%（2010年版藥典三部附錄Ⅹ D）。

3.5 殘餘抗生素活性

依法測定（2010年版藥典三部附錄Ⅸ A），不應有殘餘氨苄西林或其他抗生素活性。如製品中含有SDS，應將SDS濃度至少稀釋至0.01%再進行測定。

3.6 無菌檢查

依法檢查（2010年版藥典三部附錄Ⅻ A），應符合規定。

3.7 細菌內毒素檢查

每1支應小於10EU（2010年版藥典三部附錄Ⅻ E凝膠限度試驗）。如製品中含有SDS，應將SDS濃度至少稀釋至0.0025%再進行測定。

3.8 異常毒性試驗

依法檢查（2010年版藥典三部附錄Ⅻ F小鼠試驗法），應符合規定。

3.9 殘餘乙腈含量

如工藝中採用乙腈，則照氣相色譜法（2010年版藥典三部附錄Ⅲ C）進行。色譜柱採用石英毛細管柱，柱溫45℃，氣化室溫度150℃，檢測器溫度300℃，載氣為氮氣，流速為每分鐘4.0ml，用水稀釋乙腈標準溶液使其濃度為0.0004%，分別吸取1.0ml上述標準溶液及供試品溶液頂空進樣400μl，通過比較標準溶液和供試品溶液的峰面積判定供試品溶液乙腈含量。乙腈含量不高於0.0004%。

藥理作用

白介素-2(Interleukin-2,IL-2)是輔助型T淋巴細胞(TH)活化產生的細胞因子[1-2]。IL-2具有雙重調控免疫應變的能力,可有效誘導細胞免疫和體液免疫應答。重組人白介-素2(rhIL-2)是基因重組產品,含有133個胺基酸殘基,相對分子質量為15·5 k,其藥理作用在於增強免疫應答。

阿地白介素（IL-2)的主要生理作用是刺激和維持T細胞的分化增殖。IL-2有關腫瘤的生物學活性包括：1.刺激自然殺傷(NK)細胞的增殖和活化，並增強其活性。2.誘導細胞毒性淋巴細胞，增強其溶細胞活性。3.誘導淋巴因子活化殺傷(LAK)細胞。LAK細胞具有廣譜的抗腫瘤活性，可以溶解多種腫瘤細胞。IL-2不僅是產生LAK細胞的必需淋巴因子，而且在它的存在下還能維持LAK細胞的增殖和長期生長，因此，在臨床抗腫瘤治療時往往把IL-2和LAK細胞同時給予，這就是惡性腫瘤的過繼免疫性治療(adoptiveimmunetherapy，AIT)。4.刺激腫瘤浸潤淋巴細胞(TIL)的增生並增強其活性。動物實驗證明，TIL較LAK細胞的抗腫瘤活性高50～100倍。5.不僅能促進T細胞增殖，且對細胞有促增殖和促分化作用。在腫瘤治療的動物模型中已證明，當T細胞中介抗瘤反應強烈時，很低量的IL-2已足以激化抗瘤作用；但當T細胞中介的抗瘤反應很弱時，則需要很高劑量的IL-2。低劑量可以顯著地刺激T細胞，而激活NK及LAK細胞則要求很大劑量。因IL-2不能直接抗癌，用藥目的是最大限度地興奮免疫機制，以加強抗癌作用。以前常用的IL-2和LAK細胞聯合套用治療惡性腫瘤，現已不再推薦，而代之以IL-2與腫瘤浸潤淋巴細胞(TIL)聯合療法(過繼療法adoptive therapy)。6.rhIL-11為177個胺基酸組成的活性蛋白質。其編碼基因位於19號染色體長臂13區。作用於巨核細胞系較晚期階段的巨核細胞水平，促進巨核細胞的增殖及成熟，並促進血小板的產生。IL-11雖無巨核細胞集落刺激因子(Meg-CSF)的活性，但有巨核細胞增殖因子的活性，與GM-CSF及IL-3協同作用，可使CFU-MegDNA量增多。

藥代動力學：

本品在體內主要分布於腎臟、肝臟、脾臟和肺臟。腎臟是主要的代謝器官，腎組織細胞的組織蛋白酶D分解本品。血清中分布和消除半衰期（t1/2）分別為13分鐘和85分鐘。

適應症：

1．用於腎細胞癌、黑色素瘤、乳腺癌、膀胱癌、肝癌、直腸癌、肺癌的治療。用於癌性胸腹水的控制，也可以用於淋巴囚子激活的殺傷細胞的培養。

2．用於手術、放療及化療後的腫瘤患者的治療，可增強機體免疫功能。

3．用於先天或後天免疫缺陷症的治療．提高病人細胞免疫功能和抗感染能力。

4．各種自身免疫病的治療，如類風濕性關節炎、系統性紅斑狼瘡、乾燥綜合症等。

5．對某些病毒性、桿菌性疾病、胞內寄生菌感染性疾病，如B型肝炎、麻風病、肺結核、白色念珠菌感染等具有 一定的治療作用。

用法用量

用滅菌注射用水溶解，具體用法、劑量和療程因病而異，一般採用下述幾種方法(或遵醫囑)。
1．全身用藥：
(1)皮下(或肌肉)注射：重組人白細胞介素-2(Ala) 60～100萬IU/次(1～2支)，加2ml注射用水溶解，皮下注射3次/周，6周為一療程。
(2)靜脈注射：40～80萬IU/m₂(1～2支)，加生理鹽水500ml，滴注時間不少於4小時，每天3次，6周為一療程。
(3)介入動脈灌註：50～100萬IU/次(1～2支)，2～4周一次，2～4次為一療程。
2．區域與局部給藥：
(1)胸腹腔注入：用於癌性胸腹腔積液，重組人白細胞介素-2(Ala)100～200萬IU/m₂(1～2支)，儘量抽去腔內積液後注入，每周1～2次，2～4周(或積液消失)為一療程。
(2)腫瘤病灶局部給藥：根據瘤灶大小決定用藥量，每次用量不少於10萬IU，隔日一次，4～6次為一療程。

不良反應

各種不良反應中最常見的是發熱、寒戰，肌肉酸痛，與用藥劑量有關，一般是一過性發熱（38℃左右），亦可有寒戰高熱，停藥後3～4小時體溫多可自行恢復到正常。個別患者可出現噁心、嘔吐、皮疹、類感冒症狀。皮下注射者局部可出現紅腫、硬結、疼痛，所有副反應停藥後均可自行恢復。

注意事項

本品必須在有經驗的腫瘤專科醫師掌握下慎重使用。

使用較大劑量時，本品可能會引起毛細血管滲漏綜合徵，表現為低血壓、末梢水腫、暫時性腎功能不全等，應立即停用，積極對症處理。應注意，使用本品應嚴格掌握安全劑量。

藥瓶開啟後，應一次使用完，不得多次使用。預充式注射器包裝僅為一次性使用，不得重複使用。使用本品從小劑量開始，逐漸增大劑量。應嚴格掌握安全劑量。使用本品低劑量、長療程可降低毒性，並且可維持抗腫瘤活性。

孕婦及哺乳期婦女用藥

孕婦及哺乳期婦女慎用。小兒、有嚴重心腦腎併發症的老年人慎用。

禁忌症

1.對本品成分有過敏史的病人。

2.高熱、嚴重心臟病、低血壓者，嚴重心腎功能不全者，肺功能異常或進行過器官移植者。

3.重組人白細胞介素-2即往用藥史中出現過與之相關的毒性反應： ⑴持續性室性心動過速； ⑵未控制的心率失常； ⑶胸痛並伴有心電圖改變、心絞痛或心肌梗塞； ⑷心壓塞； ⑸腎功能衰竭需透析>72小時； ⑹昏迷或中毒性精神病>48小時； ⑺頑固性或難治性癲癇； ⑻腸局部缺血或穿孔； ⑼消化道出血需外科手術；

規格

10萬IU、20萬IU、50萬IU、100萬IU、150萬IU。