《過表達E-cadherin抑制腹膜間皮細胞轉分化的作用及機制研究》是依託中南大學，由張柯擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：過表達E-cadherin抑制腹膜間皮細胞轉分化的作用及機制研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：張柯
- 依託單位：中南大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
腹膜纖維化是影響腹膜透析(PD)遠期療效的重要因素，腹膜間皮細胞轉分化（EMT）在其中發揮重要作用。E-cadherin（ECAD）下調是EMT的起始事件。近期研究和我們的前期結果均提示ECAD在EMT中發揮保護作用，而並非僅是EMT效應分子。本研究擬通過體內外實驗，以PD患者腹透液脫落細胞、腹膜間皮細胞株為研究對象，以p120ctn和RhoA/Rock信號為切入點，套用realtime PCR、western blot、免疫共沉澱、免疫螢光等方法，觀察過表達ECAD對腹膜間皮細胞EMT關鍵分子、p120ctn表達量和分布的影響、RhoA活性的變化以及對Smad2/3磷酸化和Smad7表達的影響，探討過表達ECAD是否通過p120ctn影響RhoA活性繼而影響Smad通路從而抑制腹膜間皮細胞EMT；進行動物試驗檢測過表達ECAD對腹膜纖維化大鼠腹膜功能和腹膜纖維化的影響，證實其治療效應。
結題摘要
E-cadherin 是主要的細胞粘附分子之一，維持正常黏附功能需要與連環蛋白（catenin）結合形成E-cadherin/catenin 複合體，調控細胞粘附和信號轉導。p120ctn是catenin家族的重要成員，可以在胞膜處通過與E-cadherin 的JMD 區結合。我們前期研究發現上調腹膜間皮細胞E-cadherin的表達水平可在一定程度上逆轉TGFβ1 誘導的腹膜間皮細胞α-SMA的表達增高，但具體機制未明確。在本項目資助下，我們進一步開展E-cadherin和p120ctn在腹膜間皮細胞轉分化中的作用和可能的機制研究。我們對不同透析齡患者腹透液脫落細胞原代培養，發現在長期腹透患者中E-cadherin和P120ctn的表達明顯降低，新PD患者組脫落細胞p120ctn主要表達在細胞膜，在細胞質中僅有少量表達，而腹透一年以上組脫落細胞p120ctn在細胞膜上表達明顯減少，在細胞質中表達明顯增加，提示隨著腹膜透析時間延長，腹膜間皮細胞EMT的發生，p120ctn由細胞膜轉移至胞質中，提示P120ctn可能通過鈣粘蛋白-連環蛋白複合體，參與了腹膜纖維化過程。我們進一步套用腹膜間皮細胞株進行體外實驗，發現：TGFβ1刺激後腹膜間皮細胞p120ctn可由細胞膜轉移到細胞質中，細胞膜E-cadherin明顯減少，與原代培養改變趨勢一致，慢病毒轉染過表達E-cadherin後，提取總蛋白檢測E-cadherin、α-SMA，vimentin、p120ctn，發現過表達E-cadherin可在一定程度上減少TGFβ1導致的腹膜間皮細胞α-SMA、vimentin、E-cadherin的表達變化，提取膜蛋白檢測E-cadherin和p120cth發現，發現過表達E-cadherin削弱TGFβ1誘導的腹膜間皮細胞E-cadherin下調，同時削弱TGFβ1導致的腹膜間皮細胞p120ctn由細胞膜向細胞質轉位作用。提示過表達E-cadherin可通過與p120ctn作用維持鈣黏蛋白-連環蛋白複合體而調節腹膜間皮細胞EMT。
