《ZEB介導microRNA-200家族對腹膜間皮細胞間質轉分化的調控》是依託南昌大學，由魏昕擔任項目負責人的地區科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：ZEB介導microRNA-200家族對腹膜間皮細胞間質轉分化的調控
- 項目類別：地區科學基金項目
- 項目負責人：魏昕
- 依託單位：南昌大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
腹膜纖維化是腹膜透析常見併發症，也是導致超濾衰竭和制約腹透發展最主要的原因。間皮細胞間質轉分化（EMT）是腹膜纖維化發生和發展的關鍵環節。近年研究表明miRNAs參與了多種器官EMT和纖維化的過程，但其具體作用和機制仍不清楚。本項目用TGF-beta1誘導腹膜間皮細胞轉分化，建立EMT體外模型，觀察轉分化關鍵轉錄因子bHLH、Snail、ZEB的表達。構建含ZEB1/2的3'-UTR序列螢光素酶報告基因質粒，與miR-200分子前體或抑制物共轉染間皮細胞，以驗證ZEB是其作用靶點。繼而將miR-200分子前體或抑制物轉染誘導轉化的間皮細胞，觀察其對ZEB1/2表達及EMT的影響。最後以miR-200分子前體或抑制物干預腹膜纖維化模型，體內證實miRNA對腹膜纖維化的調控。本研究擬證明miR-200通過調控ZEB1/ZEB2而影響EMT，為腹膜纖維化的治療提出新思路。
結題摘要
腹膜透析相關腹膜纖維化是腹膜透析最常見的遠期併發症，也是導致超濾衰竭及患者退出腹透最主要的原因。然而，其發生機制尚不明，仍無有效的治療方法。microRNA是一組長度為22nt~的非編碼RNA，參與了許多生理及病理過程的調控。本研究旨在探討miR-200a在腹膜透析相關腹膜纖維化過程中的作用及機制。通過研究我們發現，在纖維化的大鼠腹膜組織中和TGF-beta1刺激的人腹膜間皮細胞內miR-200a的表達顯著下降（2-3倍），同時間皮細胞表型蛋白E-cadherin的表達下降，肌成纖維細胞表型蛋白α-SMA及細胞外基質蛋白FN, ColⅠ的表達上調，結果提示miR-200a與腹膜纖維化及被認為是纖維化始動過程的EMT密切相關。於是我們通過在細胞內轉染miR-200a mimics 和inhibitors上調及下調miR-200a的表達發現，上調miR-200a可抑制TGF-beta1誘導的腹膜間皮細胞EMT的發生，反之則促進該過程。由此確認了上述假設，即miR-200a在腹膜間皮細胞EMT的過程中發揮保護性作用。為驗證ZEB1/2是否為miR-200a抑制腹膜間皮細胞EMT過程的下游靶基因，我們進行了螢光素酶報告實驗，證實ZEB1/2的3’-UTR存在miR-200a的結合位點，miR-200a可顯著調節ZEB1/2的表達。隨後，我們在轉染了miR-200a mimics的人腹膜間皮細胞中再次證實了miR-200a可下調ZEB1/2的表達，相反，抑制miR-200a的表達將上調ZEB1/2的表達。以上結果表明，miR-200a為腹膜間皮細胞EMT過程的保護性因子，它可通過作用其靶基因ZEB1/2發揮抑制或減弱TGF-beta1誘導的腹膜間皮細胞EMT的發生。提示miR-200a可能為治療腹膜透析相關腹膜纖維化提供新的治療思路和位點。
