microRNA302c在腹膜透析腹膜纖維化中的作用及分子機制

《microRNA302c在腹膜透析腹膜纖維化中的作用及分子機制》是依託中南大學，由劉伏友擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：microRNA302c在腹膜透析腹膜纖維化中的作用及分子機制
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：劉伏友
• 依託單位：中南大學

項目摘要

腹膜透析（PD）是符合我國國情的主要腎臟替代治療手段，但長期腹膜透析可導致腹膜間皮細胞EMT及纖維化。microRNA是非編碼RNA，參與調控相關基因表達，是目前生命科學領域的研究熱點。近期我們採用高通道miRNA晶片技術對PD病人腹透流出液腹膜間皮細胞miRNA表達進行了分析，發現miRNA異常表達與PD患者腹膜EMT及纖維化密切相關，因此從miRNA著手研究其在PD過程EMT及纖維化中的作用及分子機制具有重要的理論和現實意義。本項目結合我們以往的研究基礎，採用細胞分子生物學及PD動物模型，通過觀察miR-302c在PD腹膜間皮細胞的表達，分析其與TGF-β1,CTGF及EMT相關基因的關係，鑑定TGF-β1調節miR-302c表達的分子機制，研究miR-302c在腹膜間皮細胞EMT及腹膜纖維化的作用及相關機制，旨在為闡明PD過程中EMT及腹膜纖維化的發生機制提供新的理論依據。

結題摘要

腹膜透析（PD）是符合我國國情的主要腎臟替代治療手段，但長期腹膜透析可導致腹膜間皮細胞向間充質細胞轉分化（EMT）及纖維化。microRN是非編碼 RNA，參與調控相關基因表達，是目前生命科學領域的研究熱點。我們的前期研究採用高通道miRNA晶片技術對PD患者腹透流出液腹膜間皮細胞miRNA表達進行了分析，發現miRNA異常表達與 PD 患者腹膜EMT及纖維化密切相關，因此從 miRNA著手研究其在PD過程EMT及纖維化中的作用及分子機制具有重要的理論和現實意義。本項目中我們發現CAPD患者腹透流出液腹膜間皮細胞表達microRNA302c，並隨透析時間延長表達量降低。維持透析一年組相較於新開管組結締組織生長因子（CTGF）及EMT相關蛋白vimentin、zo-1表達異常，提示隨透析時間延長患者流出液細胞發生EMT。相關性分析提示microRNA302c與CTGF及EMT相關基因表達改變有關。在接下來的體內體外試驗中，我們發現microRNA302c在PD小鼠模型及TGF-β1誘導的人腹膜間皮細胞中均表達下調，同時發現CTGF是microRNA302c的下游靶基因。microRNA302c的下調導致CTGF過表達及EMT相關基因表達改變。我們成功構建了穩定表達鼠/人microRNA302c的慢病毒載體。LV-mmu-miR-302c轉染至小鼠體內可有效上調microRNA302c的表達，從而減輕PD小鼠模型腹膜的纖維化形態改變，上調PD模型中的腹膜E-cadherin表達，下調α-SMA 、collagenⅠ表達。同時PD引起的CTGF過表達得到有效抑制。LV-hsa-miR-302c轉染人腹膜間皮細胞得到類似結果（2012 ASN 壁報）。上調microRNA302c可通過抑制CTGF的表達延緩TGF-β1誘導的人腹膜間皮細胞EMT。本項目已發表相關論文六篇（見附屬檔案），為闡明 PD 過程中 EMT 及腹膜纖維化的發生機制提供了新的理論依據。