《JNK1和JNK2在腹膜透析相關性腹膜纖維化中的作用及機制研究》是依託中山大學，由劉慶華擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：JNK1和JNK2在腹膜透析相關性腹膜纖維化中的作用及機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：劉慶華
- 依託單位：中山大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
JNK在細胞分化、凋亡及基因表達中起重要作用。我們已發現JNK介導了腹膜間皮細胞EMT，且JNK1與Smad3存在互動作用。但JNK1和JNK2在腹膜纖維化中的各自作用及機制尚不清楚。本項目研究如下：在JNK1或JNK2基因敲除小鼠，採用5/6腎切除建造尿毒症模型，腹腔注射高糖腹透液，觀察JNK1/2在腹膜纖維化中的作用及其對Smad通路的影響；分離野生型、JNK1或JNK2基因敲除小鼠原代腹膜間皮細胞，觀察TGF-β1刺激下，AP-1組成分子c-Jun和c-fos的表達，以及EMT指標的變化；進一步在小鼠原代腹膜間皮細胞，轉染c-Jun或（和）c-fos siRNA，或使用AP-1抑制劑T-5224，觀察其對Smad3與AP-1分子共定位、Smad3與Snail啟動子序列結合及EMT的影響。本項目旨在明確不同亞型JNK在腹膜纖維化中作用及分子機制，為防治腹透相關性腹膜纖維化提供新的靶點。
結題摘要
已有研究發現JNK在細胞分化、凋亡及基因表達中起重要作用。我們前期研究發現JNK介導了腹膜間皮細胞EMT，且JNK1與Smad3存在互動作用。但JNK1和JNK2在腹膜纖維化中的各自作用及機制尚不清楚。本項目主要研究內容如下：在大鼠腹腔灌注高糖腹膜透析液，觀察JNK抑制劑600125對腹膜纖維化指標的影響；同時探討了JNK抑制劑對腹腔無菌性炎症的影響。繁殖和篩選JNK1或JNK2基因敲除小鼠，腹腔灌注高糖腹透液，觀察JNK1/2在腹膜纖維化中的作用及其對Smad通路的影響；分離野生型、JNK1或JNK2基因敲除小鼠原代腹膜間皮細胞，觀察TGF-β1刺激下，Smad及EMT相關指標的變化。利用腹膜透析患者置管時的腹膜標本和長期透析後拔管時的腹膜標本，行腹膜病理染色，觀察腹膜纖維化程度和相關指標的表達。結果發現：JNK抑制劑能夠抑制c-Jun的磷酸化活化，也能明顯抑制腹膜纖維化指標的表達，同時，對腹膜組織IL-1、TNF-a、MCP-1等的表達有抑制作用。成功繁殖和篩選JNK1或JNK2基因敲除小鼠，通過病理染色發現，JNK1基因敲除鼠腹膜纖維化明顯改善，而JNK2基因敲除不能抑制腹膜纖維化進程；成功分離和培養小鼠原代腹膜間皮細胞，TGF-β1刺激細胞後，Snail 蛋白及EMT相關指標表達上調，JNK1基因敲除能夠抑制Smad3的活化及細胞EMT，但對Smad2活化無明顯影響，而JNK2基因敲除對Smad3的活化以及EMT均無明顯影響。此外，利用腹膜透析患者腹膜標本，病理和IF結果發現：長期腹膜透析後，腹膜纖維化程明顯度增加、Collagen I表達增加。總之，該研究結果進一步證實了JNK在腹膜纖維中的作用，且明確了不同亞型JNK在腹膜纖維化中作用及分子機制，JNK1可能起關鍵作用，該發現將為防治腹透相關性腹膜纖維化提供新的靶點。
