蛋白質純化技術及套用

《蛋白質純化技術及套用》是2005年9月化學工業出版社出版的圖書，作者是陸健。

基本介紹

• 書名：蛋白質純化技術及套用 
• 作者：陸健
• 出版社：化學工業出版社
• 出版時間：2005年9月
• 頁數：352 頁
• 開本：16 開
• 裝幀：平裝
• ISBN：7502573828

內容簡介

本書介紹了蛋白質純化技術，對基本原理及套用實例作了詳細的闡述。全書共十一章，主要內容包括：蛋白質樣品的預處理，凝膠過濾色譜，離子交換色譜，親和色譜，共價色譜，電泳技術，特殊用途蛋白質的純化，不同來源蛋白質的純化，蛋白質的常用指標分析以及實驗部分。書中不少內容在國內還是首次被系統介紹。

本書適合綜合性大學及農、醫、師範等高校相關專業教師和學生使用，也可供從事生物技術、醫藥工業和食品技術等相關工業領域及研究院所的研發人員參考。

目錄

1緒論1

1.1蛋白質純化的意義1

1.2純化蛋白質常用的方法1

1.3蛋白質純化的設計2

1.3.1基本原則2

1.3.2過程最佳化3

1.3.3經濟性4

1.4規模化蛋白質純化5

1.4.1基本原則5

1.4.2主要操作過程6

2蛋白質樣品的預處理11

2.1蛋白質樣品的提取和分離11

2.1.1細胞的破碎12

2.1.2蛋白質樣品的分離15

2.2蛋白質樣品的濃縮17

2.2.1吸附法18

2.2.2超濾法18

2.2.3沉澱法20

2.2.4透析法21

2.2.5冷凍乾燥法21

2.2.6雙水相分離法21

2.3蛋白質樣品的沉澱22

2.3.1鹽析法23

2.3.2有機溶劑沉澱法25

2.3.3等電點沉澱法26

2.3.4聚乙二醇沉澱法26

2.3.5選擇性沉澱法27

2.4蛋白質樣品的透析27

2.4.1基本原理27

2.4.2套用28

3凝膠過濾色譜29

3.1概述29

3.1.1基本原理29

3.1.2凝膠的性質和種類36

3.1.3凝膠介質的選擇41

3.2凝膠柱的操作42

3.2.1裝柱42

3.2.2樣品和緩衝液的準備46

3.2.3色譜條件47

3.2.4加樣和洗脫48

3.2.5凝膠柱的再生及保存49

3.3套用49

3.3.1脫鹽49

3.3.2蛋白質分離50

3.3.3測定蛋白質分子量51

3.3.4蛋白質復性的研究51

3.3.5其他52

4離子交換色譜53

4.1基本概念54

4.1.1蛋白質的電性質55

4.1.2離子交換理論60

4.1.3離子交換的解析度62

4.2固定相：離子交換劑66

4.2.1基本結構66

4.2.2功能基團和酸鹼性質67

4.2.3離子交換劑的部分性質68

4.2.4離子交換劑的類型74

4.3流動相：緩衝液和鹽86

4.3.1緩衝液的類型87

4.3.2緩衝液的pH和濃度88

4.3.3離子對色譜行為的影響89

4.3.4添加劑90

4.4實驗方案設計91

4.4.1離子交換劑的選擇91

4.4.2緩衝液的選擇和色譜條件的確定94

4.4.3色譜柱的尺寸98

4.4.4分批分離99

4.5色譜技術100

4.5.1離子交換劑的準備100

4.5.2樣品的準備102

4.5.3加樣103

4.5.4洗脫技術105

4.5.5樣品的收集和處理113

4.5.6離子交換劑的再生、清洗、消毒和儲存114

4.6套用實例115

4.6.1用DEAESepharose色譜分離真菌纖維素酶115

4.6.2用Mono S和Mono Q連續色譜法從雞肌肉組織分級分離

糖酵解酶類116

4.6.3用Mono Q陰離子交換分離白血病細胞N乙醯βD氨基

葡萄糖苷酶的同工酶117

4.6.4用BioRex　70色譜分離眼鏡蛇神經毒素的六種單乙醯基衍

生物118

4.6.5用階段洗脫法大規模純化人血清白蛋白和免疫球蛋白G119

5親和色譜120

5.1親和吸附劑121

5.1.1配體和載體的選擇121

5.1.2親和吸附劑的製備方法123

5.1.3商品化基團特異性吸附劑128

5.2色譜技術130

5.2.1親和色譜操作過程130

5.2.2親和色譜的操作注意事項132

5.2.3親和色譜的吸附容量與吸附效率132

5.3親和色譜的特殊類型133

5.3.1凝集素親和色譜133

5.3.2免疫親和色譜137

5.3.3環氧乙烷丙烯醯胺珠親和色譜140

5.3.4金屬螯合親和色譜142

5.3.5疏水作用色譜144

5.4套用145

5.4.1抗體和抗原的純化145

5.4.2酶的純化145

5.4.3糖蛋白的純化145

5.4.4脂蛋白的純化145

6共價色譜146

6.1巰基的化學性質147

6.1.1離子化、氧化、金屬聯結、烷基化147

6.1.2巰基二硫化物互換反應148

6.1.3與活性二硫化物的反應149

6.1.4巰基與二硫氧化物的反應150

6.2含巰基的蛋白質151

6.2.1生物體中的氧化還原態151

6.2.2胞內與胞外的蛋白質151

6.2.3蛋白質巰基基團的解蔽151

6.2.4蛋白質二硫鍵的還原152

6.2.5巰基的引入152

6.2.6巰基基團的衍生化作用152

6.3共價色譜的凝膠152

6.3.1原理152

6.3.2凝膠的基質153

6.3.3凝膠的固定相153

6.3.4固定相活性基團的比較153

6.3.5凝膠固定相的引入155

6.3.6凝膠的取代程度和實際容量157

6.4色譜技術158

6.4.1預備158

6.4.2蛋白樣品的結合158

6.4.3洗滌159

6.4.4還原洗脫159

6.4.5巰基蛋白的回收160

6.4.6巰基凝膠的再生161

6.4.7反向共價色譜162

6.5套用實例162

6.5.1從刀豆中分離脲酶162

6.5.2木瓜蛋白酶的純化163

6.5.3共價色譜的順序洗脫164

6.5.4巰基多肽的純化165

6.5.5大腸桿菌β半乳糖苷酶的可逆固定165

6.5.6蛋白質亞基的鑑定166

7電泳技術167

7.1概述167

7.1.1原理167

7.1.2分類169

7.1.3介質170

7.1.4電泳儀器172

7.1.5染色方法173

7.2常規聚丙烯醯胺凝膠電泳174

7.2.1原理174

7.2.2常規PAGE的類型175

7.2.3影響分離結果的外在因素175

7.2.4蛋白質分子量的測定176

7.2.5常規PAGE的實驗方法177

7.2.6PAGE的套用範圍181

7.3SDS聚丙烯醯胺凝膠電泳181

7.3.1原理181

7.3.2SDSPAGE的類型182

7.3.3影響分離結果的外在因素182

7.3.4蛋白質分子量的測定183

7.3.5SDS聚丙烯醯胺凝膠電泳的實驗方法183

7.3.6SDSPAGE的套用範圍184

7.4等電聚焦184

7.4.1原理185

7.4.2載體兩性電解質pH梯度的形成186

7.4.3載體兩性電解質等電聚焦方法187

7.4.4固相pH梯度的介質及其pH梯度的形成189

7.4.5固相pH梯度等電聚焦方法192

7.4.6等電聚焦的套用範圍194

7.5雙向電泳194

7.5.1原理194

7.5.2雙向電泳實驗方法194

7.5.3套用196

7.6免疫電泳197

7.6.1原理197

7.6.2電泳方法199

7.6.3套用200

7.7蛋白質印跡200

7.7.1原理200

7.7.2試驗材料的選擇201

7.7.3蛋白質印跡試驗方法202

7.7.4套用203

7.8毛細管電泳203

8特殊用途蛋白質的純化204

8.1測序用蛋白質的純化204

8.1.1測序蛋白純化技術205

8.1.2多肽的製備和純化207

8.2用於晶體學研究的蛋白質純化208

8.2.1蛋白質結晶方法211

8.2.2不均一性對蛋白質結晶的影響214

8.3融合蛋白的純化218

8.3.1融合蛋白的純化過程219

8.3.2蛋白質的水解保護225

8.3.3常用融合技術227

8.3.4融合蛋白純化實例231

8.4包含體的初步純化233

8.4.1影響包含體形成的因素233

8.4.2細胞勻漿中包含體的分離233

8.4.3包含體的洗滌233

8.5膜蛋白的純化234

8.5.1蛋白質的溶解性235

8.5.2膜蛋白的純化237

8.6治療用蛋白質的純化238

8.6.1治療用蛋白純化的關鍵問題239

8.6.2工藝確認242

9不同來源蛋白質的純化244

9.1微生物細胞培養蛋白質的純化244

9.1.1色譜純化方法244

9.1.2蛋白質離子交換純化245

9.2哺乳動物細胞培養蛋白質的純化250

9.2.1工藝設計251

9.2.2細胞分離252

9.2.3產品的初步回收和分離252

9.2.4主要純化方法252

9.2.5樣品純化舉例——單克隆抗體的純化253

9.2.6消除污染254

9.3動物組織蛋白質的純化256

9.3.1組織的選擇256

9.3.2組織破碎257

9.3.3防止蛋白質的有害水解257

9.3.4亞細胞分級分離257

9.3.5膜蛋白的溶解259

9.3.6動物蛋白質純化舉例260

9.4植物組織蛋白質的純化263

9.4.1影響植物組織蛋白質純化的因素263

9.4.2材料來源263

9.4.3確定植物蛋白種類的直接和間接策略267

9.4.4樣品純化舉例268

10蛋白質的常用指標分析271

10.1蛋白質的含量分析271

10.1.1測定蛋白質濃度的方法271

10.1.2紫外分光光度法271

10.1.3Lowry法274

10.1.4二喹啉甲酸檢測法277

10.1.5考馬斯亮藍染色法278

10.2蛋白質的分子量測定281

10.2.1SDSPAGE凝膠電泳法測定蛋白質的分子量282

10.2.2凝膠過濾色譜法測定天然蛋白質的分子量286

10.3蛋白質的等電點測定288

10.3.1蛋白質的等電點288

10.3.2等電聚焦技術289

10.3.3超薄聚丙烯醯胺凝膠等電聚焦法測定蛋白質的等電點289

10.4蛋白質的純度分析294

10.4.1純度標準294

10.4.2常用的純度檢測方法294

10.5糖蛋白質中的糖含量分析296

10.5.1糖蛋白的化學分析296

10.5.2SDS凝膠中的糖蛋白染色法297

10.6蛋白質和肽的N末端胺基酸測定299

10.6.1FDNB法300

10.6.2DNS分析法301

10.6.3Edman降解法304

10.7蛋白質N末端序列分析306

10.7.1DNSEdman法308

10.7.2DABITC/PITC雙偶合法309

10.8蛋白質和肽的C末端分析313

10.8.1概述313

10.8.2C末端序列分析的羧肽酶Y法314

11實驗部分317

11.1用於蛋白質純化的儀器(工作站)317

11.1.1蛋白質純化系統的主要部件317

11.1.2幾種常見的蛋白質色譜系統320

11.2蛋白質分離純化實例322

11.2.1蔗糖酶的分離純化322

11.2.2轉谷氨醯胺酶的分離純化323

11.2.3純化重組蛋白Pseudomonasaeruginosa外毒素A325

11.2.4E.coli中RNA聚合酶的提取和純化329

11.2.5從E.coli中分離製備高純度的去乙醯頭孢菌素C合成酶330