基本介紹
- 中文名：膠體金免疫色譜技術
- 外文名：gold immune chromatographic assay
- 套用：農殘、寄生蟲病、過敏原等檢測
- 檢測類型：定性檢測
- 優點：簡便、快速、高效
- 缺點：結果只有陰性和陽性
膠體金免疫層析試紙的工作原理,在動物源性食品檢測中的套用,
膠體金免疫層析試紙的工作原理
免疫膠體金標記技術是以膠體金作為示蹤標誌物，套用於抗原抗體反應中的一種新型免疫標記技術。膠體金是由氯金酸水溶液在還原劑作用下，聚合成特定大小的金顆粒，顆粒之間因靜電作用形成一種穩定的膠體狀態，也稱金溶膠。膠體金由於具有膠體穩定性。蛋白質強吸附性和高電子密度等特性，在金標蛋白結合處，在顯微鏡下可見黑褐色顆粒，當這些標記物在相應的配體處大量聚集時，肉眼可見紅色或粉紅色斑點，因而可用於定性或半定量的快速免疫檢測方法中。
將特異的抗體或抗原以條帶狀固定在硝酸纖維素（NC）膜上的某一區域，該區域有控制線和顯示結果的測試線，當樣品加入膜一端（如加樣孔）時，藉助毛細管作用向前移動，樣品沿著膜運動到達該區域後，樣品中相應的抗原或抗體與該抗原或抗體發生特異性結合而被截留，使該區域顯示一定的顏色，通過可目測的膠體金標記物得到直觀的顯色結果，而流離標記物則越過這一區域，達到自動分離的目的。該方法用肉眼即可判讀檢測結果，可實現目標物的快速檢測。膠體金免疫層析法就是利用膠體金本身的顯色特點結合免疫層析技術用來診斷特異性的待測物。
1．非競爭性作用原理：即雙抗體夾心法。檢測試劑是一種與乳膠顆粒或膠體金屬(一般採用膠體金)相偶聯的待測抗原的特異性配體(即抗體Abl)，它被沉積在結合墊上。當樣品(尿、血漿、全血等)加到樣品墊後，由於毛細管作用，樣品迅速浸透結合墊，檢測試劑被溶解，並隨著樣品流沿膜條向前移動。若樣品中存在待測抗原，它就會和檢測試劑中的抗體結合形成Ag—Abl。隨後，樣品通過固化有捕獲試劑(一般是待測抗原的另一表位特異性抗體Ab2)的測試線(testline)區域，將待測抗原一檢測試劑複合物捕獲形成Abl—Ag—Ab2複合物。樣品繼續前移，通過固化有抗Abl抗體(二抗Ab3)的質控線(control line)區域，形成Ab3一Abl—Ag—Ab2複合物。這種方式通常用於檢測帶有多個抗原位點的分析，如絨毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin，HCG)、人類免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV)等。
2．競爭性作用的原理：檢測試劑仍是與乳膠顆粒或膠體金結合的抗體(Abl)，而捕獲試劑則是待測抗原或待測抗原的模擬物。若樣品中含有待測抗原，則樣品和檢測試劑形成複合物(Ag—Abl)，即樣品中的待測抗原將檢測試劑中的抗體完全飽和。隨後在通過已固化有捕獲試劑的區域時，不再發生反應，測試線處不顯色；樣品繼續前移。複合物(Ag—Abl)被已固化在質控線處的抗Abl的抗體(二抗Ab2)所結合，形成Abl—Ag—Ab2複合物，使質控線顯色。這種方式適用於檢測帶有單一抗原表位的小分子抗原，常用於違禁藥物的檢測等。
在動物源性食品檢測中的套用
在動物源性食品檢測領域的套用是近幾年才發展起來。國內的研究主要集中在疾病診斷領域，對在動物源性食品檢測方面套用的研究剛剛開始。
1、在動物源性食品質量控制領域的套用
對於那些不需要精確定量檢測，但需要快速得出檢測結果的成分分析，膠體金免疫層析技術尤為適用。
2、在動物源性食品病原微生物檢測領域中的套用
由於膠體金免疫層析技術操作簡單、檢測時間短、便於現場操作，可以為現場執法帶來科學依據。
3、免疫膠體金技術在動物源性食品病毒病診斷中的套用
一些不法商販在食品行業競爭過程中採用不正當手段，活體帶病動物和食用性動物胴體致病菌的超標、農藥獸藥等的殘留、違禁物質的添加等問題層出不窮，給食品安全問題帶來了嚴重的隱患。由於金標試紙條的診斷具有快速性和準確性的優點，也開始被逐漸套用於畜禽病毒病的現場檢測。
4、免疫膠體金技術在動物源性食品細菌病診斷中的套用
5、免疫膠體金技術在動物源性食品寄生蟲診斷中的套用
大多數寄生蟲病是人獸共患性疾病，因此，對畜禽寄生蟲病的早期快速診斷具有很重要的公共衛生學意義。
6、在動物源性食品其他殘留領域的快速檢測套用
動物源性食品中違禁藥物（如激動劑、激素等）的殘留、重金屬和生物毒素含量超標已成了困擾世界食品衛生的難題。這些殘留不僅影響我國畜禽產品的出口貿易，同時威脅著消費者的健康。許多國家以獸藥殘留監控為技術壁壘，阻止我國畜產品的正常出口。利用免疫膠體金快速診斷來初測農畜產品中的重金屬離子含量，可以節省時間，大大加快檢測進程，提高現場抽查和快速通關檢測的效率。
國內外已經建立了針對有機污染物的免疫膠體金檢測方法，並且將該方法用於重金屬離子的分析檢測，迄今為止，免疫膠體金檢測技術已經成功用於水中的銦、汞、鎘、鉛和鈾等的檢測#在毒素檢測方面，膠體金試紙條也顯示出它的優勢。
