套用
在藥物分析中,免疫分析法的套用主要集中在以下幾方面:(1)在實驗
藥物動力學和臨床藥物學中測定
生物利用度和
藥物代謝動力學參數等
生物藥劑學中的重要數據,以便了解藥物在體內的吸收、分解、代謝和排泄情況;(2)在藥物的臨床檢測中,對
治療指數小、超過安全劑量易發生嚴重不良反應或最佳治療濃度和
毒性反應濃度有交叉的藥物血液濃度進行監測;(3)在藥物生產中從發酵液或細胞培養液中快速測定有效組分的含量,以實現對生產過程的線上監測;(4)對藥品中是否存在特定的微量有害雜質進行評價。
分類
免疫擴散
基本原理:可溶性的抗原和相應的抗體在溶液或凝膠中彼此接觸,形成不溶性抗原-抗體複合物沉澱。
單向免疫擴散(Single immunodiffusion)
基本原理:指抗原和抗體兩 種成分中只有一種擴散,另 一種被固定在凝膠中。
雙向免疫擴散(Double immunodiffusion)
電泳技術
基本原理:免疫擴散與電泳技術相結合。
對流免疫電泳
基本原理:多數蛋白質抗原在鹼性緩衝液中帶負電荷,在電泳時從負極向正極移動。抗體在鹼性緩衝液只帶微弱的負電 荷,且相對分子質量較大,電泳力較小,在
瓊脂電滲力作用 下由正極向負極移動。結果抗原和抗體定向對流,在兩孔間 相遇時發生反應,並在比例合適處形成肉眼可見白色沉澱線。
火箭免疫電泳
(Rocket immunoelectrophoresis)
基本原理:也稱免疫擴散,抗原在含有定量抗體的
瓊脂糖中泳動,兩者比例適宜時,在較短時間內生成錐形的沉澱峰。在一定濃度範圍內,沉澱峰的高度與抗原含量成正比。
免疫電泳
基本原理:先將待側樣本作
瓊脂凝膠電泳,各蛋白抗原組分被分成不同的區帶,然後與電泳方向平行挖一小槽,加入相應的
抗血清,把分成區帶的蛋白抗原成分作雙向免疫擴散,在各區帶相應的位置形成沉澱弧。
標記技術
放射免疫標記技術(RIA)
基本原理:根據
抗原抗體特異性結合的原理,以放射性同位素標記抗原或抗體,根據射線的多少定性或定量測定待檢標本中抗體或抗原的量。
酶免疫標記技術(ELISA)
磁敏免疫分析(MI)
基本原理:通過
分子靶標綁定方法,將納米級導磁鐵珠(
免疫磁珠)與待測蛋白抗體結合併固化於
巨磁阻(
GMR, Giant Magneto Resistance) 晶片表面,基於GMR晶片的
巨磁阻效應,晶片表面的免疫磁珠會劇烈影響GMR的原態電阻,根據GMR電阻變化率實現定量測定樣本中待測抗體含量。
磁敏免疫分析技術屬於
生物晶片技術家族成員。
螢光免疫分析(FIA)
基本原理:以
螢光素標記抗體或抗原作為
示蹤劑的一種新的免疫分析技術,其原理與ELISA相似。該法既可對液體中的抗原和抗體定量,也可對組織切片中的抗原、抗體進行定性和定量。一般由於樣品、試劑的
自身螢光和激發
光的散射,本底螢光高,影響了測定的靈敏度。一般以
鑭系元素作為螢光標記(示蹤劑)。示蹤劑與相應抗原或抗體結合後,藉助螢光檢測儀察看
螢光現象或測量
螢光強度,從而判斷抗原或抗體的存在、定位和分布情況或檢測受檢標本中抗原或抗體的含量。
膠體金免疫技術(CGIA )
基本原理:以膠體金作為示蹤標記物,主要利用了金 顆粒具有高電子密度的特性 ,在金標蛋白結合處,在顯 微鏡下可見黑褐色顆粒,當 這些標記物在相應的配體處 大量聚集時,肉眼可見紅色 或粉紅色斑點。
化學發光免疫技術(CLIA )
基本原理:利用化學或生物發光系統作為
抗原抗體反應的指示系統,藉以定量檢測抗原或抗體的方法,發光物質可直接作為
抗原抗體的標記物,也可以游離形式用於催化劑(酶)和輔助劑標記的抗原或抗體的發光反應中。