《肺炎克雷伯菌對替加環素的新耐藥機制研究》是依託復旦大學，由王明貴擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：肺炎克雷伯菌對替加環素的新耐藥機制研究
- 依託單位：復旦大學
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：王明貴
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
現有研究提示，腸桿菌科細菌對替加環素的耐藥主要由多藥外排泵AcrAB的過表達引起。但申請人前期對10株替加環素耐藥肺炎克雷伯菌的研究發現，有6株菌的耐藥機制不能用現有機制解釋，提示存在新的耐藥機制。本研究擬：①通過基因轉錄組測序及全基因組測序，發現替加環素敏感與耐藥肺炎克雷伯菌（包括臨床及體外誘導耐藥株）的差異表達基因及差異基因，再通過基因敲除或定點突變，確定新的替加環素耐藥基因；②通過蛋白質組學和蛋白質印跡，發現替加環素耐藥菌的差異表達外膜蛋白，採用敲除技術確定與耐藥相關的外膜蛋白；③比較耐藥與敏感菌株新耐藥基因上游調控序列的差異，通過克隆、基因敲除/定點突變，了解新基因的局部調控通路；對常見整體調控子分別予以基因敲除或定點突變，確定調控新耐藥基因的整體轉錄激活子，從而闡明新耐藥基因的調控通路。通過對替加環素耐藥機制的深入研究將為該藥的臨床合理套用提供支持，為新藥的研發提供思路。
結題摘要
以往研究表明，腸桿菌科細菌對替加環素耐藥主要由整體轉錄激活子RamA表達上調，導致多藥外排泵AcrAB過表達而產生。本項目對替加環素不敏感的肺炎克雷伯菌的耐藥機制開展研究。在臨床分離菌中發現了不能用現有耐藥機制解釋的替加環素耐藥肺炎克雷伯菌。通過基因敲除及回補、凝膠遷移實驗等發現RamA蛋白可以與acrA和oqxB啟動子的相互作用，RamA同時調控AcrAB及OqxAB 2個外排泵，首次闡明了RamA介導的肺炎克雷伯菌對替加環素耐藥的外排泵調控新機制。在對臨床治療過程中收集的一對由替加環素敏感到耐藥的肺炎克雷伯菌的研究中，首次發現外排泵表達抑制子 RamR 基因上游核糖體結合位點(RBS)丟失，導致外排泵（AcrAB）高表達而致肺炎克雷伯菌對替加環素的耐藥。研究成果對於進一步明確肺炎克雷伯菌臨床分離菌對替加環素的耐藥機制、特別是外排泵的調控機制具有重要的意義。 課題總體按原計畫完成，到達預期目標。課題執行過程中，增加了對肺炎克雷伯菌替加環素體內耐藥機制的研究內容。相關研究成果發表SCI論文10篇，2篇文章在投。獲得授權國家發明專利1項。項目負責人在本領域大型國際會議ECCMID作特邀專題報告1次，研究成果作大會口頭交流1次。課題組成員4名獲得國家自然自然科學青年科學基金項目；培養博士研究生10名。項目負責人擔任感染性疾病領域頂級雜誌CID中國特刊主編，就中國當今耐藥形勢與挑戰發表評述與綜述，並組織我國的多學科專家，牽頭制定廣泛耐藥(XDR)革蘭陰性桿菌感染防治共識，指導臨床耐藥菌感染的抗菌治療。
