《多重耐藥外排泵基因oqxAB的表達調控及遺傳環境研究》是依託復旦大學，由袁瑾懿擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：多重耐藥外排泵基因oqxAB的表達調控及遺傳環境研究
- 依託單位：復旦大學
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：袁瑾懿
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
細菌對喹諾酮類的耐藥由多種機制引起，2004年報導oqxAB基因編碼外排泵可使細菌對環丙沙星等多藥敏感性下降。申請者前期研究發現，臨床分離肺炎克雷伯菌株中均存在OqxAB外排泵，而部分菌株仍對環丙沙星高度敏感，實時PCR測定發現敏感株的oqxAB表達水平顯著低於耐藥株；分析基因周邊結構，推測oqxAB基因周邊的調控子可能參與其表達調控。本研究①通過酶切克隆、定點突變等方法獲得oqxAB基因及其周邊調控基因的克隆，利用實時PCR技術，闡明調控基因序列及結構改變對oqxAB基因表達水平及耐藥表型的影響,揭示其表達調控機制；②通過質粒攜帶oqxAB基因遺傳環境的生物信息學分析，探索耐藥基因的起源和傳播；③通過最低防突變濃度測定、耐藥突變株基因分析，明確oqxAB基因表達在喹諾酮耐藥突變選擇中的作用。本課題有助於進一步揭示細菌對喹諾酮類的耐藥機制，為臨床防控耐藥菌株的產生和傳播提供理論依據。
結題摘要
大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌，是臨床重要致病菌，可引起多種感染。近年來，腸桿菌科細菌對氟喹諾酮類等抗菌藥的耐藥性日益嚴重，給臨床抗菌治療帶來巨大挑戰。2004年發現的RND家族多重耐藥外排泵OqxAB可介導大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌等對喹諾酮類多種臨床常用抗菌藥和喹乙醇等藥物耐藥性升高。本課題 （1）檢測2010年3月~5月臨床連續分離大腸埃希菌136株和肺炎克雷伯菌共154株，首次報導肺炎克雷伯菌100%攜帶oqxAB基因，基因檢出率遠高於同期其他國家和地區。大腸埃希菌中oqxAB基因同源性極高，首次在大腸埃希菌中發現oqxA和oqxB新亞型，分別命名為oqxA2、oqxB2和oqxB3。（2）測定喹諾酮類不同耐藥水平的肺炎克雷伯菌中oqxAB的表達水平，並探討局部調控子和整體調控子對oqxAB表達的調控機制，結果顯示oqxAB表達受局部調控子oqxR和rarA調節。受試肺炎克雷伯菌臨床株主要為ST 11型（34%）。首次發現呈現為多重耐藥的ST 494型肺炎克雷伯菌流行。共發現10株ST 494型菌株（19%），均為喹諾酮類耐藥或敏感性下降（環丙沙星MICs 1 ~ 16 mg/L），慶大黴素和頭孢他啶耐藥；檢測其中4株oqxAB外排泵基因表達水平均升高，PCR擴增其質粒介導喹諾酮耐藥基因，其中3株同時攜帶qnrD和aac(6’)-lb-cr基因。（3）首次發現69K bp大片段缺失的肺炎克雷伯菌臨床株K065，缺失片段包括ramA等63個基因。與GenBank已知全基因序列的9株肺炎克雷伯菌比較，可發現該69K bp大片段缺失為K065特有。臨床病史資料、小鼠肺炎模型結果、毒力基因檢測均提示該菌株為低致病力菌株。而該菌株攜帶多種耐藥基因，在患者體內定植近2月，可能導致耐藥基因播散。首次在肺炎克雷伯菌中發現整體調控基因ramA正調控oqxAB外排泵基因表達，並在介導細菌耐藥和致病力方面的也起著重要作用。通過本研究明確oqxAB在介導喹諾酮類耐藥中的作用，闡明其主要調控機制，探討ramA基因在介導細菌耐藥等方面的作用，為臨床應對日益升高的喹諾酮類耐藥性提供理論依據。
