《肺炎克雷伯菌耐替加環素的分子機制研究》是依託浙江大學，由鄭焙文擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：肺炎克雷伯菌耐替加環素的分子機制研究
- 依託單位：浙江大學
- 項目負責人：鄭焙文
- 項目類別：青年科學基金項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
替加環素是治療碳青黴烯類抗生素耐藥肺炎克雷伯菌的主要藥物，但近年來全球替加環素耐藥菌株不斷增加，其耐藥機制尚不清楚。本課題完成了替加環素耐藥菌株的全基因組測序，發現染色體編碼多個OqxAB和ArcAB外排泵，通過Real-time RT-PCR證實oqxA和acrA表達水平與耐藥相關，但其調控機制不明；本課題擬在此基礎上對不同替加環素敏感性的肺炎克雷伯菌採用高通量測序、比較基因組學分析、轉錄組測序等技術，以從全局研究耐藥機制，通過找變數再靶向驗證的策略，分析全基因組水平的SNPs，鑑別差異表達的基因，研究OqxAB和AcrAB的轉錄調控及其協同調控網路，進一步通過Real-time RT-PCR在不同耐藥水平的菌株中驗證，最後通過基因敲除實驗鑑定耐藥基因的生物學功能。通過此研究，系統闡明肺炎克雷伯菌對替加環素耐藥的形成機制，為預防替加環素耐藥菌株的播散和藥物新靶點的探索提供理論基礎。
結題摘要
我國臨床肺炎克雷伯菌分離株對替加環素耐藥性逐漸提高，而其對替加環素耐藥的機制依舊不明。本課題針對某三甲醫院分離的替加環素非敏感菌株開展流行病學研究，選取了其中的32株替加環素耐藥肺炎克雷伯菌作為研究對象，建立了PFGE，MLST，比較基因組學，RNA-seq以及RT-PCR研究方法，系統地探討了外排泵在肺炎克雷伯菌替加環素耐藥機制中的作用。我們的結果表明本研究所覆蓋的耐替加環素肺炎克雷伯菌的MLST與PFGE的分型結果基本一致，而ST37是耐藥菌株的主要流行克隆。通過對典型替加環素耐藥菌株5422的比較基因組研究發現其與K. pneumoniae ATCC BAA-2146的親緣關係最近，而且5422菌株的基因組中編碼了16組外排泵。RNA-seq與RT-PCR實驗證實5422菌株的替加環素耐藥與AcrAB和OqxAB外排泵的表達有重要的關聯，在高濃度的替加環素脅迫作用下，這兩個外排泵系統的表達量大幅提高，與抗生素濃度成正比關係。我們的研究為部分肺炎克雷伯菌對替加環素耐藥的機制提供了合理解釋，並為預防替加環素耐藥菌株的播散和藥物新靶點的探索提供理論基礎。
