聚丙烯醯胺凝膠電泳技術是指聚丙烯醯胺凝膠由丙烯醯胺(簡稱Acr)和交聯劑N,N'一亞甲基雙丙烯醯胺(簡稱Bis)在催化劑過硫酸銨(APS),N,N,N',N' 四甲基乙二胺(TEMED)作用下,聚合交聯形成的具有網狀立體結構的凝膠,並以此為支持物進行電泳。
基本介紹
- 中文名:聚丙烯醯胺凝膠電泳技術
- 出處:分子生物學
聚丙烯醯胺凝膠電泳技術是指聚丙烯醯胺凝膠由丙烯醯胺(簡稱Acr)和交聯劑N,N'一亞甲基雙丙烯醯胺(簡稱Bis)在催化劑過硫酸銨(APS),N,N,N',N' 四甲基乙二胺(TEMED)作用下,聚合交聯形成的具有網狀立體結構的凝膠,並以此為支持物進行電泳。
聚丙烯醯胺凝膠電泳技術是指聚丙烯醯胺凝膠由丙烯醯胺(簡稱Acr)和交聯劑N,N'一亞甲基雙丙烯醯胺(簡稱Bis)在催化劑過硫酸銨(APS),N,N,N',N' 四甲基乙二胺(TEMED)作用下,聚合交聯形成的具有網狀立體結構的凝膠,並以此為支持物進行電泳。聚丙烯醯胺凝膠電泳技術可根據不同蛋白質分子所帶電荷...
這就是套用凝膠電泳技術分離DNA片段的基本原理。分類 (1)瓊脂糖和聚丙烯醯胺凝膠電泳 瓊脂糖是一種線性多糖聚合物,是從紅色海藻產物瓊脂中提取而來的。當瓊脂糖溶液加熱到沸點後冷卻凝固便會形成良好的電泳介質,其密度是由瓊脂糖的濃度決定的。經過化學修飾的低熔點(LMP)的瓊脂糖,在結構上比較脆弱,因此在較低的...
聚丙醯胺凝膠電泳屬於分子生物學,屬於中性電泳。電泳簡介 聚丙醯胺凝膠電泳 中性聚丙烯醯胺凝膠電泳 安裝電泳裝置和配製凝膠溶液 操作步驟 1.必要時可用KOH/甲醇清洗玻璃板和間隔片。2.用溫熱的去污劑溶液洗滌玻璃板和間隔片,再充分漂洗,先用自來水,再用去離子水。應拿取玻璃的邊緣部分或帶手套操作,以免手上的...
非變性聚丙烯醯胺凝膠電泳(Native-PAGE)或稱為活性電泳是在不加入SDS 和巰基乙醇等變性劑的條件下,對保持活性的蛋白質進行聚丙烯醯胺凝膠電泳,常用於酶的鑑定、同工酶分析和提純。未加SDS的天然聚丙烯醯胺凝膠電泳可以使生物大分子在電泳過程中保持其天然的形狀和電荷,它們的分離是依據其電泳遷移率的不同和凝膠的...
十二烷(基)硫酸鈉-聚丙烯醯胺凝膠電泳SDS polyacrylamide gel electrophoresis。簡介 在陰離子表面活性劑十二烷(基)硫酸鈉(SDS)存在下進行的一種聚丙烯醯胺凝膠電泳。由2-巰基乙醇等將S-S鍵切斷的蛋白質,在SDS溶液中,大多是1克約與1.4克的SDS結合,形成電荷密度大致一定的複合體。所以在凝膠中電泳的速度是...
技術的改進 雙向電泳利質譜技術的飛速發展,使得蛋白質分折從傳統的單個蛋白質分離分析很快轉向複雜樣品中的大量蛋白質的同時分離和鑑定,加快了高通量蛋白質的分析進程。針對二維聚丙烯醯胺凝膠電泳技術的一些缺陷和飛速發展的蛋白質組研究對分離技術的需求,近年來升發出許多基於傳統二維聚丙烯醯胺凝膠電泳技術的改進方法,...
帶電荷的物質在電場中的趨向運動稱為電泳。核酸電泳是進行核酸研究的重要手段,是核酸探針、核酸擴增和序列分析等技術所不可或缺的組成部分。核酸電泳通常在瓊脂糖凝膠或聚丙烯醯胺凝膠中進行,濃度不同的瓊脂糖和聚丙烯醯胺可形成分子篩網孔大小不同的凝膠,可用於分離不同分子量的核酸片段。概念簡介 凝膠電泳操作簡便、...
定性聚丙烯醯胺凝膠電泳是在不加入SDS 和疏基乙醇等變性劑的條件下,對保持活性的蛋白質進行聚丙烯醯胺凝膠電泳,常用於酶的鑑定、同工酶分析和提純。未加SDS的天然聚丙烯醯胺凝膠電泳可以使生物大分子在電泳過程中保持其天然的形狀和電荷,它們的分離是依據其電泳遷移率的不同和凝膠的分子篩作用。可以得到較高的解析度...
變性聚丙烯醯胺凝膠法是分子生物學常用技術之一,凝膠的灌制比水平電泳槽凝膠灌制困難,漏膠和產生氣泡常在所難免,需經過反覆實踐才能掌握其灌制技巧。運用變性聚丙烯醯胺凝膠垂直電泳分離PCR產物條帶,硝酸銀染色顯示條帶進而篩選兩者間差異基因。聚丙烯醯胺為水溶性高分子聚合物,不溶於大多數有機溶劑,具有良好的絮凝...
電泳是分離混合物中離子成分的最有效方法之一。以聚丙烯醯胺凝膠作支持物的電泳稱為聚丙烯醯胺凝膠電泳。聚丙烯醯胺凝膠電泳用於分離蛋白質和寡核苷酸。其套用可以分為兩大類,一類是屬於可以直接在凝膠上觀察計算;另一類需要洗脫回收膠中特定的蛋白和核酸。尿聚丙烯醯胺凝膠電泳實質是尿蛋白電泳,是將尿蛋白按其分子量...
變性聚丙烯醯胺凝膠,是分子生物學常用技術之一,凝膠的灌制比水平電泳槽凝膠灌制困難,漏膠和產生氣泡常在所難免,需經過反覆實踐才能掌握其灌制技巧。簡介 我們在用mRNA差異顯示技術篩選成人難治性腎病與激素敏感性腎病綜合徵患者間差異基因的實驗中,運用變性聚丙烯醯胺凝膠垂直電泳分離PCR產物條帶,硝酸銀染色顯示條帶...
凝膠可用:聚丙烯醯胺凝膠、瓊脂糖凝膠、葡聚糖凝膠等。技術特點 ①解析度高,可將等電點相差0.01~0.02 pH單位的蛋白質分開;②靈敏度高,可以分離濃度很低的樣品,且重複性好;③隨電泳時間的延長,區帶越來越窄;④樣品混合液可以加在電泳系統的任何部位,通過等電聚焦作用,各組分均能聚焦到各自等電點的pH...
凝膠電泳儀通常用於分析用途,但也可以作為製備技術,在採用某些方法(如質譜(MS)、聚合酶鏈式反應(PCR)、克隆技術、DNA測序或者免疫印跡)檢測之前部分提純分子。科學原理 以凝膠(如聚丙烯醯胺凝膠、瓊脂糖凝膠等)為支撐物的區帶電泳。套用學科 生物化學與分子生物學(一級學科);方法與技術(二級學科) 。使用方法...
凝膠電泳 瓊脂糖是從海藻中提取出來的一種多聚多糖,是由D-半乳糖和L-半乳糖以α-1,3和β-1,4糖苷鍵相連形成的線狀高聚物。瓊脂糖遇冷水膨脹,溶於熱水成溶膠,冷卻後成為孔徑範圍從50nm到大於200nm的凝膠。瓊脂糖或聚丙烯醯胺凝膠電泳是分離鑑定和純化DNA片段的標準方法。該技術操作簡便快速,可以分辨用其它...
(4) 染色與脫色 取下凝膠板,用甲苯胺藍溶液染色,用水洗去多餘的染色液至背景無色為止。聚丙烯醯胺凝膠電泳法 操作法 (1)制膠 取溶液A2ml,溶液B5.4ml,加脲2.9g使溶解,再加水4ml,混勻,抽氣趕去溶液中氣泡,加0.56%過硫酸銨溶液2ml,混勻製成膠液,立即用裝有長針頭的注射器或細滴管將膠液沿管壁...
⑹在酸性或鹼性緩衝液中均可進行電泳,而且可加入兩性電解質進行等電點電泳,可用含電解質表面活性劑(SDS)或非電解質表面活性劑(Np40、Tritonx-100等)的凝膠進行電泳,亦可使兩者組合進行雙向電泳等等,使用範圍廣泛,利用價值日益提高;⑺由於染色技術的進步,可以進行定量,也可檢測出極微量的斑點(瓊脂糖電泳)...
《聚丙烯醯胺凝膠電泳》是1975年 科學出版社出版的圖書,作者是莽克強。圖書簡介 本書介紹了聚丙烯醯胺凝膠電泳技術在分離、分析和製備蛋白質、核糖核酸等生物大分子方面的基本原理和具體操作。套用部分著重介紹了蛋白質、核糖核酸的分子量測定及該技術近年來在病毒學研究工作中的一些套用。本書可供臨床化學、食品化學、...
雙鏈DNA分子在一般的聚丙烯醯胺凝膠電泳時,其遷移行為決定於其分子大小和電荷。不同長度的DNA片段能夠被區分開,但同樣長度的DNA片段在膠中的遷移行為一樣,因此不能被區分。DGGE/TGGE技術在一般的聚丙烯醯胺凝膠基礎上,加入了變性劑(尿素和甲醯胺)梯度,從而能夠把同樣長度但序列不同的DNA片段區分開來。一個特定...
這種變性的單鏈DNA的遷 移率幾乎與其鹼基組成及序列完全無關, 可以保證DNA分子電泳譜帶的單-性。 (王保捷)基本原理 雙鏈DNA分子在一般的聚丙烯醯胺凝膠電泳時,其遷移行為決定於其分子大小和電荷。不同長度的DNA片段能夠被區分開,但同樣長度的DNA片段在膠中的遷移行為一樣,因此不能被區分。DGGE/TGGE技術在一般...
電泳遷移率變動分析,又稱凝膠阻滯實驗,英文名electrophoretic mobility shift assay,簡稱EMSA。是體外利用電泳遷移率的變化來分析DNA與蛋白質相互作用的一種特殊的凝膠電泳技術。實驗方法 通常用32P標記DNA分子,而不標記蛋白質。電泳結束後,用放射自顯影技術顯現具放射性標記的DNA條帶位置。如果細胞蛋白提取物中不存在...
技術簡介 二維凝膠電泳(two—dimensional gel electrophoresis,2一DE)是蛋白質組研究中最有效的分離技術。它由兩向電泳組成,第一向是以蛋白質電荷差異為基礎進行分離的等電聚焦凝膠電泳,第二向是以蛋白質分子量差異為基礎的SDS—聚丙烯醯胺凝膠電泳。雙向凝膠電泳技術最先是由O’Farrell於1975年所描述,其原理是在...
聚丙烯醯胺凝膠電泳[法]聚丙烯醯胺凝膠電泳[法](polyacrylamide gel electrophoresis)是1995年經全國科學技術名詞審定委員會審定發布的醫學名詞。發布時間 1995年經全國科學技術名詞審定委員會審定發布的醫學名詞。出處 《醫學名詞 第三分冊》
非還原性聚丙烯醯胺凝膠電泳 不含巰基乙醇或二硫蘇糖醇(DTT)等還原劑的聚丙烯醯胺凝膠電泳。在這種電泳中蛋白質的二硫鍵不會被還原打開,與還原性聚丙烯醯胺凝膠電泳的結果對比,可以分析蛋白質單體間借二硫鍵形成多聚體的情況。
毛細管電泳序列分析法(capilaryelectrophoresis,CE)是建立在原有的高解析度變性聚丙烯醯胺凝膠電泳序列分析法的基礎上的一種分析法。 其毛細管電泳的基本裝置是在充滿電解質的毛細管兩端施加高壓,由於不同分子量大小和帶不同電荷的分子在其中具有不同的泳動速度,從而達到分離的目的。在序列分析時,先用末端終止或...
為了防止擴散,穩定pH梯度,就必須加入一種抗對流和擴散的支持介質,最常用的這種支持介質就是聚丙烯醯胺凝膠。當進行聚丙烯醯胺凝膠等電聚焦電泳時,凝膠柱內即產生pH梯度,當蛋白質樣品電泳到凝膠柱內某一部位,而此部位的pH值正好等於該蛋白質的等電點時,該蛋白質即聚焦形成一條區帶,只要測出此區帶所處部位的...
瓊脂糖凝膠分離DNA片段大小範圍較廣,不同濃度瓊脂糖凝膠可分離長度從200bp至近50kb的DNA片段。其解析度雖比PAGE電泳低,但它製備容易。瓊脂糖通常用水平裝置在強度和方向恆定的電場下電泳。PAGE電泳 聚丙烯醯胺凝膠電泳(polyacrylamide gelelectrophoresis,簡稱PAGE),是以聚丙烯醯胺凝膠作為支持介質的一種常用電泳技術。
又稱免疫電聚焦。是電泳分析方法之一。實際上它是免疫擴散電泳和等電聚焦技術相聯合的一種電泳分析方法。性質 具體操作大致有三種情況。(1)圓盤免疫等電聚焦是用聚丙烯醯胺凝膠柱先行等電聚焦,把微克量樣品(如混合蛋白質)分開之後,把這凝膠柱條再包埋在具有緩衝體系的瓊脂凝膠中,各蛋白隨即擴散到瓊脂膠內,並...
電洗脫法是將在某些支持物中含有的目的成分電泳遷移出來的技術。如瓊脂糖、聚丙烯醯胺凝膠電泳後,將含有所分離成分的凝膠切出來,放在適當的電場中,使凝膠內所要的成分移到緩衝液中。洗脫也可以分為兩種:一種是選擇與配體有親和力的物質進行洗脫,另一種是選擇與待分離物質有親和力的物質進行洗脫。用染料作為配體...
Western印跡法是將獲得的蛋白質樣品通過SDS-聚丙烯醯胺凝膠電泳,對不同分子量的蛋白質進行分離,然後通過轉移電泳將凝膠上分離到的蛋白質轉印到固相支持物上。簡介 蛋白質經單向電泳後分離後被轉移到硝酸纖維濾膜上,然後用放射性或酶標記的特異抗體來檢測相應抗原的存在。蛋白質印跡技術是1975年Southern建立了Southern...